[发明专利]一种环二核苷酸或其类似物的中性/阳离子混合脂材纳米制剂及其应用

说明书

本发明公开了一种环二核苷酸(cyclic dinucleotides,cDN)或其类似物的中性/阳离子混合脂材纳米制剂及其应用。所述的制剂由中性胞苷脂材DNCA、阳离子脂材CLD、PEG2000‑DSPE、金属盐/PBS缓冲体系以及环二核苷酸组成。经过本发明方法包载后得到的环二核苷酸或其类似物的中性/阳离子混合脂材纳米制剂，具有稳定性好、递送效率高、入胞能力强、生物活性高且毒性低等优点，在抗肿瘤免疫、抗病毒/细菌感染及自身免疫疾病治疗方面具有重要的潜在应用价值。

技术领域

本发明涉及一种由中性/阳离子混合脂材包载的环二核苷酸(cDN)或其类似物的纳米制剂、还涉及该制剂的制备方法和应用。本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

迄今为止，共发现四例环二核苷酸(cyclic dinucleotides,cDN)类第二信使分子，来源于微生物的环二鸟苷酸(cyclic dimeric guanosine monophosphate,c-di-GMP)、环二腺苷酸(c-di-AMP)及3′,3′-环鸟苷腺苷酸(3′,3′-cGAMP)；及哺乳动物体内发现的2′,3′-环鸟苷腺苷酸(2′,3′-cGAMP)，它们在生命体系的信号转导系统中发挥着重要的调控作用。

J.Chen课题组于2013年发现其靶标为天然免疫信号通路中的关键接头蛋白—干扰素基因刺激因子(STING)。STING被激活后从内质网膜转运至高尔基体，同时细胞质中的TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)被募集至高尔基体中发生自磷酸化，并结合STING使其磷酸化。携带STING-TBK1复合物的囊泡随后转移到核周区域，并与结构保守带正电的IRF3结合，IRF3被TBK1磷酸化激活，随后与STING蛋白解离，二聚化，易位到细胞核中以诱导干扰素(interferon,IFN)及其它细胞因子的表达。STING蛋白已被证实与肿瘤、病原微生物感染、自身免疫等多种疾病的发生发展密切相关，cDN类化合物作为其激动剂，已然成为继免疫检查点抑制剂之后的肿瘤免疫治疗的潜力药物，目前正在进行I期临床试验，并获得了令人鼓舞的初步结果。然而cDN类化合物存在易被磷酸二酯酶降解、给药后容易发生随机扩散和清除及带负电荷导致的跨膜困难等问题，使临床应用受到限制。

化学结构修饰和载体递送是解决上述问题的两个有效策略，Aduro Biotech公司开发的Rp,Rp-2′,3′-c-diAMPSS(ADU-S100)是第一个进入临床试验cDN类似物，其在THP-1细胞中的EC₅₀为41.5μmol·L^-1，明显高于2',3'-cGAMP(EC₅₀252.5μmol·L^-1)，且ADU-S100注射给药可以显著抑制肿瘤生长及癌细胞转移。此后，Aduro Biotech公司与诺华制药公司在ADU-S100的基础上，合作开发了得到了活性最优的核糖3′-位双F取代cDN类似物，其EC₅₀值为4.5μmol·L^-1，与ADU-S100相比提高了8倍。化学修饰提高了cDN类分子的稳定性及与靶标STING的亲和力，但依然存在负电荷难以跨膜的问题，且活性浓度远高于体内生理浓度，具有潜在的药物毒性问题。

目前正在进行临床研究的cDN类药物均未涉及载体递送技术，新型高效低毒的递送载体可以有效弥补化学修饰所不能解决的问题，保障cDN分子稳定性的同时进一步降低其给药浓度。传统药物载体包括阳离子脂质体和阳离子聚合物两大类，由于表面正电荷的存在，可以通过静电相互作用与药物结合，但静脉注射后会与带负电荷的血清蛋白结合，导致靶向性差并且无法在体内长时间循环；且可以与细胞中的生物膜相结合，破坏其正常膜结构，产生较强的体内毒性。