[发明专利]脊髓OLIG2+神经祖细胞诱导及自我更新培养体系、诱导方法及应用

权利要求书

1.一种人多能干细胞来源的脊髓OLIG2⁺神经祖细胞诱导及自我更新培养体系，其特征在于，由基础培养基以及与该基础培养基分别组合使用的诱导分化因子和体外维持因子组成，

其中，所述基础培养基由DMEM/F12液体基础培养基、0.5-5×B27添加剂、0.5-5×N2添加剂、1％青霉素/链霉素、0.01-500μg/mL2-磷酸-维生素C组成；

所述诱导分化因子由0.01-50μMGSK3抑制剂、0.01-500μMTGFβ抑制剂以及0.01-500μMBMP抑制剂组成；

所述体外维持因子由0.01-50μMGSK3抑制剂、0.01-500μMTGFβ抑制剂、0.01-5000ng/mLSonicHedgehog、0.01-20μMSmoothened激动剂、0.01-500ng/mLEGF家族生长因子、0.01-500ng/mLFGF家族生长因子、0.01-500μMBMP抑制剂、0.01-50μMJAK1/2抑制剂、0.01-10000nMSrc激酶抑制剂和0.01-50μMRetinoicAcid组成，

所述GSK3抑制剂为CHIR99021、BIO及LY2090314中的一种或多种；

TGFβ抑制剂为SB431542、LY2109761及A-83-01中的一种或多种；

BMP抑制剂为DMH1、K02288、LDN-193189、Noggin中的一种或多种；

Smoothened激动剂为purmorphamine、SAG及GSA10中的一种或多种；

EGF家族生长因子为EGF、TGFα及HB-EGF中的一种或多种；

FGF家族生长因子为FGF1～FGF23中的任意一种或多种；

JAK1/2抑制剂为Ruxolitinib、AZD1480、Pacritinib及Filgotinib中的一种或多种；

Src激酶抑制剂为Dasatinib、Saracatinib及KX2-391中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的人多能干细胞来源的脊髓OLIG2⁺神经祖细胞诱导及自我更新培养体系，其特征在于：

其中，B27添加剂的量为0.5×B27添加剂，N2添加剂的量为0.5×N2添加剂，2-磷酸-维生素C的浓度为60μg/mL。

3.根据权利要求1所述的人多能干细胞来源的脊髓OLIG2⁺神经祖细胞诱导及自我更新培养体系，其特征在于：

其中，所述诱导分化因子中，GSK3抑制剂为3μM的CHIR99021，TGFβ抑制剂为2μM的SB431542，BMP抑制剂为2μM的K02288；

体外维持因子中，GSK3抑制剂为1μM的CHIR99021，TGFβ抑制剂为2μM的SB431542浓度，SonicHedgehog的浓度为100ng/mL，Smoothened激动剂为0.2μM的SAG，EGF家族生长因子为10ng/mL的EGF，FGF家族生长因子为20ng/mL的FGF2，BMP抑制剂为1μM的K02288，JAK1/2抑制剂为1μM的Ruxolitinib，Src激酶抑制剂为10nM的Dasatinib，RetinoicAcid的浓度为0.5μM。