[发明专利]一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于S基因断裂的AAV‑HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用。本发明采用同源重组的方法构建pAAV‑HBV1.04质粒，通过三质粒共转染293T细胞方法体外包装生产重组病毒。用重组病毒通过尾静脉注射免疫系统正常的C57BL/6小鼠形成HBV cccDNA持续存在的HBV慢性感染小鼠模型。本发明中的小鼠模型能产生真实HBV cccDNA并且能作为唯一得转录模板发挥功能。本发明构建的新型HBV慢性感染小鼠模型可用于研究长期慢性感染条件下HBV cccDNA形成和维持的机制，用于研究与免疫系统相关的问题，用于寻找和评估新的抗HBV药物。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是嗜肝性DNA病毒，基因组为部分双链松弛环状DNA(Relaxed circular DNA,rcDNA)，全长约3.2kb，是目前已知的最小的DNA病毒(Ganem,D.and A.M.Prince,Hepatitis B virus infection--natural history andclinical consequences.N Engl J Med,2004.350(11):p.1118-29.)。HBV感染宿主细胞后其rcDNA会在宿主细胞细胞核中被DNA损伤修复系统修复为共价闭合环状DNA(covalentlyclosed circular DNA,cccDNA)，cccDNA是病毒转录的模板。尽管疫苗能有效预防HBV感染，但是对全球约2.5亿慢性乙肝患者没有帮助(WHO.Hepatitis B Fact Sheet.Availableat:https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b(Accessed:March 2020)(2020).)。HBV慢性感染能导致逐渐恶化的肝疾病如肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌，仍然是严重的公共健康问题。HBV建立长期慢性感染不能被清除的主要原因是其复制中间体cccDNA无法被现有药物清除。

目前美国食品和药品管理局(FDA)批准用于治疗乙型肝炎的药物为干扰素α和核苷/核苷酸类似物，核苷/核苷酸类似物可以有效抑制病毒的复制，但是不能清除病毒感染已经建立的cccDNA池，停药后病毒复制反弹。干扰素α也能抑制病毒复制，但是存在副作用大，应答率低，费用昂贵等问题，也不能清除cccDNA池(Gregorek,H.,et al.,Persistenceof HBV-DNA in children with chronic hepatitis B who seroconverted to anti-HBsantibodies after interferon-alpha therapy:correlation with specific IgGsubclass responses to HBsAg.J Hepatol,2005.42(4):p.486-90.)。研究HBV慢性感染机制和寻找新的能治愈乙型肝炎药物仍然是重大的科学问题。目前关于cccDNA生物学特征还不是很清楚，主要原因是缺乏合适的慢性感染模型。HBV长期慢性感染的原因是cccDNA的长期稳定存在，不能被彻底清除。因此建立合适的HBV慢性感染模型来寻找这些问题的答案十分关键。