[发明专利]一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及应用有效
| 申请号： | 202110034255.X | 申请日： | 2021-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN112725292B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 夏宇尘;李聪;钟有权 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/36;C12N15/864;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 基因 断裂 aav hbv 重组 病毒 乙肝病毒 小鼠 模型 建立 方法 应用 | ||
1.一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒，其特征在于：将HBV基因组从S基因处断开使得AAV-HBV1.04本身无法支持HBV复制，只有当重组发生产生cccDNA后HBV复制才能发生，所述重组病毒载体质粒序列见SEQ ID NO.3所示。
2.如权利要求1所述的一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒的制备方法，其特征在于：扩增AAV载体骨架，以2倍体为模板扩增HBV目的片段，再通过同源重组方法构建到AAV载体质粒中；其中，所述HBV2倍体的核苷酸序列见SEQ ID NO.2，用于扩增AAV载体骨架的引物序列见SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示，用于扩增HBV目的片段的引物序列见SEQ IDNO.6，SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
3.根据权利要求2所述的一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒的制备方法，其特征在于：所述重组病毒包装的HBV基因型为D型或A、B、C、E、F、G基因型中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒的制备方法，其特征在于：所述重组病毒为血清型为8型的AAV8重组AAV病毒或者血清型为6型，7型，9型的重组AAV病毒。
5.如权利要求1所述的一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒在制备用于建立HBVcccDNA持续存在慢性感染小鼠模型的制剂中的应用。
6.如权利要求1所述的一种基于S基因断裂的AAV-HBV重组病毒在建立HBV cccDNA持续存在慢性感染小鼠模型中的应用。
7.一种乙肝病毒cccDNA小鼠模型的建立方法，其特征在于：将权利要求1中所述的重组病毒载体质粒通过三质粒共转染法转染293T细胞体外包装生产重组AAV-HBV1.04病毒，用重组AAV-HBV1.04病毒通过尾静脉注射免疫系统正常的C57BL/6小鼠形成HBV cccDNA持续存在的HBV慢性感染小鼠模型。
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