[发明专利]一种利用副黄假单胞菌降解污水中苯酚的方法在审
| 申请号： | 202110032503.7 | 申请日： | 2021-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN113023900A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 朱宏飞;丁宁;李白莲 | 申请（专利权）人： | 辽宁工程技术大学 |
| 主分类号： | C02F3/34 | 分类号： | C02F3/34;C12N1/20;C12N1/02;C02F101/34;C12R1/38 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 123000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 副黄假单胞菌 降解 污水 苯酚 方法 | ||
1.一种利用副黄假单胞菌(P.parafulva)DTSP2(现专利保藏于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC NO.61389)降解污水中的苯酚方法，其特征在于按照以下工艺步骤进行：
(1)目标菌种的筛选
①配制乳糖胆盐培养基(LBB)：按照LBB标准配比配制液体培养基,120℃～130℃灭菌20～40min，固体培养基需要加入15～25g/L琼脂粉，其它成分与液体培养基相同；
②革兰氏阴性菌和苯耐菌选择性富集：将5～10ml下游水样加入到100mL的选择性灭菌液体培养基中，向LBB中加入苯，浓度为0.8～1.2mg/mL，接种瓶以100～120转/分的速度在25～35℃振荡到至浑浊状态培养10h～12h；
③将液体培养物用苯在固体LBB上划线；
④配制Luria-Bertani(LB)培养基：按照标准配比配制LB液体培养基，120℃～130℃灭菌20min～40min，固体培养基需要加入15～25g/L琼脂粉，其它成分与液体培养基相同。
⑤将含有黄色素的单个菌落转移到固体LB培养基中，以增加其生长；
(2)目标菌的分离和鉴定
使用通用引物27F/1492R对16SrRNA基因进行了靶向扩增，以获得(1)中分离株的物种信息。纯化的扩增子由大连Takara公司进行测序，将获得的序列通过BLASTn查询16SrRNA序列数据库，根据检索到的序列，使用Mega6.0软件分析该分离株的系统发育关系；
(3)苯酚降解率测定及应用
①采用梯度法测定分离菌的苯酚耐受极限：将处于指数期(密度约为1×107-1×108菌群形成单位/ml)的菌株接种到含苯酚的LB培养基中，从100～1200mg/l依次设置苯酚浓度梯度，为了避免数据波动，每次降解浓度测定重复三次；所有的容量瓶在25℃～35℃、100～120转/分的条件下培养10～12h，苯酚浓度使用高效液相色谱(HPLC)测量，苯酚降解率(PDR)由降解物与初始量的比值确定；
②苯酚降解菌的实际应用：利用模拟样品检测菌株对苯酚的降解能力，尝试利用该菌株进行环境保护或修复。
2.根据权利要求1所述的一种副黄假单胞菌DTSP2降解污水中苯酚的方法，其特征在于对菌种的筛选并通过设置苯酚浓度梯度，寻找该降解菌对苯酚降解率最高的浓度，进而找到该降解菌最佳应用场合。
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