[发明专利]一种(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法

权利要求书

1.一种(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，包括如下步骤：以3-氯苯丙酮为底物，在重组酮羰基还原酶、辅酶/辅酶循环氢供体NADP+/NADPH、辅酶循环酶、助溶剂和缓冲液的存在下，进行生物催化反应生成(R)-3-氯苯丙醇；其中所述重组酮羰基还原酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，合成路线如下：

2.根据权利要求1所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，所述重组酮羰基还原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，所述重组酮羰基还原酶的制备方法为：将核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的羰基还原酶经过优化DNA序列后，进行PCR扩增，随后导入羰基还原酶表达载体的HindⅢ和BamHⅠ酶切位点获得重组表达载体，将重组表达载体电转入羰基还原酶表达细胞中，得到酮羰基还原酶表达工程菌，经过抗生素抗性平板涂布筛选后，获得克隆菌株，检测其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示后，对获得的菌株进行活化后发酵培养，离心收集菌体，洗涤并重悬，超声破碎，冻干得到重组酮羰基还原酶。

4.根据权利要求3所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，所述羰基还原酶表达载体为pRSFDuet-1；所述羰基还原酶表达细胞为E.coli BL21(DE3)。

5.根据权利要求3所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的羰基还原酶来源于一株野生酵母菌株，它为光滑假丝酵母Candida glabrata ATCC2001。

6.根据权利要求1所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，3-氯苯丙酮与酮羰基还原酶的质量比为1:0.1～1；所述助溶剂选自异丙醇、DMSO或乙醇。

7.根据权利要求1所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，3-氯苯丙酮与助溶剂的质量体积比为1:10～50g/mL；所述缓冲液为PB缓冲液，其浓度为0.2mM，pH为6.5。

8.根据权利要求1所述的(R)-3-氯苯丙醇的酶催化合成方法，其特征在于，所述辅酶循环酶为异丙醇脱氢酶、葡糖脱氢酶或甲酸脱氢酶。

9.一种重组酮羰基还原酶，其特征在于，该重组酮羰基还原酶的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。

10.一种表达权利要求9所述的重组酮羰基还原酶的基因工程菌。