[发明专利]一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法。本发明公开了一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法，包括下列步骤：(1)待测样品预处理；(2)液相色谱‑质谱联用检测进行标准曲线制备；(3)液相色谱‑质谱联用检测待测样品中cAMP浓度浓度。本发明方法快速、准确、灵敏度高，样品预处理方法简单，重复性良好，精密度与准确度较高，灵敏度高，且检测限较低。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法。

背景技术

环磷酸腺苷(cAMP)是细胞内参与调节物质代谢和生物学功能的重要物质，是生命信息传递的“第二信使”。在体内可以促进心肌细胞的存活，增强心肌细胞抗损伤、抗缺血和缺氧能力；促进钙离子向心肌细胞内流动，增强磷酸化作用，促进兴奋-收缩偶联，提高心肌细胞收缩力，增加心输出量；同时还扩张外周血管，降低心脏射血阻抗，减轻心脏前后负荷，增加心排出量，改善心功能，从而对心脏起到营养心肌、正性肌力、舒张血管、抗血小板凝聚和抗心律失常的作用，在临床上主要用于治疗心功能不全、心绞痛和心肌梗死。因此，检测动物血浆与尿液中环磷酸腺苷浓度具有重要的生理意义，对于评价药物对动物分泌环磷酸腺苷的影响也有重要作用。

目前，最常用的体液(血浆、尿液、脑脊液等)中cAMP检测方法主要有酶联免疫法(ELISA)。虽然ELISA应用较广泛，但是仍存在一些缺点，主要为操作过程有些繁琐，易出现假阳性结果，重复性待提高。液相色谱串联质谱法相对于ELISA具有更加简单、快速、准确的优点。

本方法除首次建立了体液中cAMP液相色谱串联质谱检测法外，并且针对现有方法检测过程繁琐、时间长的缺点进行了改进和优化，以节省检测时间、同时保证了检测的准确性和可靠性，从而使之更加有利于评价药物和临床样本的高通量筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法。

本发明公开了一种液质联用测定生物体液样品中cAMP浓度的高灵敏方法，包括下列步骤：

(1)待测样品预处理；

(2)液相色谱-质谱联用检测进行标准曲线制备；

(3)液相色谱-质谱联用检测待测样品中cAMP浓度；

所述待测样品预处理为生物体液样品以磷酸二酯酶抑制剂(P DE s)为稳定剂，以待测物的氘代化合物为内标，取一定体积的血浆与尿液样品，加入一定体积的氘代内标混合溶液，混合后再加入到固相萃取板中，先以2％甲酸淋洗，再以100％MeOH淋洗，最后以含5％氨水的MeOH洗脱目标化合物，于N2下吹干，加入90％乙腈复溶，摇匀5min，即得待测样品。

在优选例中，所述生物体液样品为血浆、尿和/或脑脊液；所述生物体液样品为血浆，其含有抗凝剂，如EDTA-K2(肝素钠)等。

优选例中，磷酸二酯酶抑制剂优选为PDE4选择性抑制剂或PDE7选择性抑制剂，更优选为IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)、尼莫地平、长春西汀、IC86340、IC224、EHNA、BAY60-7750、IC933、双嘧达莫、西洛他唑、西洛酰胺、米力农、氨力农、依诺昔酮和、氰胍佐旦、茶碱、咯利普兰、吡拉米司特、罗氟司特、西洛司特、BRL-50481、IC242、喹唑啉类小分子化合物S14、噻二唑类小分子化合物VP1.15；最优选为IBMX。