[发明专利]带电材料的纯化方法

说明书

本发明的一个目的是在具有带电部分的化合物的纯化中，在不进行附着至用于纯化的吸附剂的保存液的置换步骤和保持步骤的情况下，抑制由所述保存液导致的所述化合物的洗脱位置的变化。一种用于纯化具有带电部分的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：制备含有具有带电部分的化合物的组合物；制备包含缓冲剂和醇的缓冲液，所述缓冲剂至少部分地含有磷酸钙化合物，具有在pH 6.0至pH 8.0范围内的缓冲能力，并且在极性溶剂中是可溶的而在非极性溶剂中是不溶的；将吸附剂保存在所述缓冲液中；通过使所述组合物与保存在所述缓冲液中的所述吸附剂接触而使所述化合物吸附在所述吸附剂上；以及通过梯度洗脱将所述化合物与所述吸附剂分离。

技术领域

本发明涉及一种带电材料的纯化方法，更具体地涉及一种使用包含磷酸钙化合物的吸附剂在抑制或防止溶解能力(resolution)的变化下的纯化方法。

背景技术

磷酸钙化合物如羟基磷灰石具有优异的生物相容性，并且因此已经广泛用作用于液相色谱的柱(吸附装置)中的吸附剂，通过其样品液中包含的带电材料如蛋白质被吸附和脱附(例如，参见专利文献1)。

在这样的用于液相色谱的柱中，通过将该带电材料吸附在由磷酸钙化合物构成的吸附剂上，然后使其从吸附剂上脱附来进行样品液中的带电材料的分离。样品液中的带电材料的分离可以通过重复吸附和脱附而多次进行。

使用磷酸钙化合物吸附剂的带电材料的分离可以在没有时间间隔的情况下重复进行，或在前次分离后一定时间段(保存期)如七天以上的间隔后进行。在带电材料的下次分离之前的一定时间段期间，可以将吸附剂保持在保存液如高浓度氢氧化钠溶液(例如，约1.0M)或磷酸盐缓冲液(例如，约0.4M)中。

磷酸钙化合物吸附剂在保存液中保存一定时间段不期望地改变了与吸附剂的钙位点结合的带负电材料如酸性蛋白质的分离位置(洗脱时间)，而未观察到与吸附剂的磷酸根位点结合的带正电材料如碱性蛋白质的分离位置(洗脱时间)的变化。

因此，通过使用已经在保存液如氢氧化钠溶液或磷酸盐缓冲液中保存的吸附剂，并且以预定量分级分离(分部分离，fractionate)从用于液相色谱的柱中流出的洗脱物，其中带负电材料被分离的级分在保存期前后不期望地发生变化。为了回收所需的带负电材料，使得必需消除要收集的级分的分离位置在保存期前后的差异，这费时又费力。

作为一种解决这样的问题的技术，公开了一种在将柱在保存液中保存一定时间段之后，通过将保存液改变为具有相对较低浓度的磷酸盐缓冲液并且将吸附剂在其中保持一段时间的步骤，而用于抑制带负电材料的洗脱位置在保存期前后的变化的方法(例如，参见专利文献2)。然而，因为这种方法需要在保存步骤之后使用磷酸盐缓冲液的额外步骤，所以从增强分离操作的效率的角度来看需要改进。需要进一步的改进以防止带正电材料的洗脱位置的变化。

专利文献

专利文献1：JP 2013-534252 A

专利文献2：WO 2019/224660

发明内容

发明目的

本发明的一个目的是，在具有带电部分的化合物的纯化中，在不进行附着至用于纯化的吸附剂的保存液的置换步骤和保持步骤的情况下，抑制由保存液导致的所述化合物的洗脱位置的变化。

解决问题的手段

作为优选实施方案，本发明包括以下实施方案中的任一个。

[A1]

一种用于纯化具有带电部分的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

制备含有具有带电部分的化合物的组合物；

制备包含缓冲剂和醇的缓冲液，所述缓冲剂至少部分地含有磷酸钙化合物，具有在pH 6.0至pH 8.0范围内的缓冲能力，并且在极性溶剂中是可溶的而在非极性溶剂中是不溶的；