[发明专利]B淋巴细胞特异性鹅膏毒素抗体缀合物

说明书

本申请涉及缀合物，其包含鹅膏毒素、其中靶点为CD20的靶点结合部分(即CD20结合部分)，和任选存在的连接所述鹅膏毒素和所述CD20结合部分的连接基。本发明还涉及所述缀合物的合成。此外，本发明涉及包含这样的缀合物的药物组合物，其特别用于治疗B细胞和/或淋巴瘤相关疾病和/或恶性肿瘤。

发明领域

本申请涉及缀合物，其包含鹅膏毒素、其中靶点为CD20的靶点结合部分(即CD20结合部分)，和任选存在的连接所述鹅膏毒素和所述CD20结合部分的连接基。本发明还涉及所述缀合物的合成。此外，本发明涉及包含这样的缀合物的药物组合物，其特别用于治疗B细胞和/或淋巴瘤相关疾病和/或恶性肿瘤。

背景

CD20是细胞表面的、膜包埋的35-37kDa非糖基化磷蛋白，其是某些B细胞前体(前体B淋巴细胞)和成熟B淋巴细胞的特征。所述CD20抗原既不在浆细胞上表达，也不在造血干细胞和早期前体B淋巴细胞上表达。迄今为止还没有鉴定出天然CD20配体。CD20在B细胞向浆细胞的发育、生长和分化中发挥作用，并且能够实现最佳的B细胞免疫应答，特别是针对非T细胞依赖性抗原。一些数据已经表明，CD20可作为Ca²⁺膜通道维持细胞内Ca²⁺浓度，并允许B细胞的活化(Winiarska等人，2007年)。

所述CD20抗原是跨膜4A蛋白家族的成员；其结构由4个位于细胞质内的具有氨基和羧基末端的跨膜结构域组成(因此，CD20也被称为MS4A1-跨膜结构域4亚家族A，成员1)。CD20具有两个细胞外环。较短的一个环(第一跨膜区和第二跨膜区之间的七个氨基酸片段)可能不会延伸到细胞膜之外；该环在MS4A家族的每个成员中都是相同的。较长的环是第三跨膜区和第四跨膜区之间的具有二硫键的43个氨基酸片段，并且其被大多数抗CD20抗体识别。尽管存在许多丝氨酸和苏氨酸磷酸化的共有位点，但在CD20分子的任何细胞质区域中都没有酪氨酸残基或识别的信号转导基序。

CD20可以作为二聚体和四聚体与至少一种另外的蛋白质组分复合存在。所述CD20蛋白已被报道与跨膜衔接蛋白p75/80(也称为C末端ste激酶结合蛋白Cbp)、CD40和主要组织相容性复合体II类蛋白(MHC II)密切相关。CD20抗原在B淋巴细胞分化过程中发生构象变化，并且至少存在两种CD20的构象异形体(Winiarska等人，2007年)。

某些特性使所述CD20抗原成为单克隆抗体(mAb)疗法的有吸引力的靶点。所述CD20抗原似乎是最稳定的淋巴细胞抗原之一。它在血浆中不作为能够竞争性地抑制单克隆抗体与淋巴瘤细胞结合的游离蛋白循环，在抗体结合后不会从CD20阳性细胞表面脱落，并且在大多数体内和体外研究中，未检测到CD20表面分子的内化或CD20表达的下调。

所述抗CD20、B细胞特异性嵌合单克隆抗体利妥昔单抗(rituximab)是监管机构批准的第一种用于治疗多种癌症和自身免疫病(如非霍奇金B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和类风湿性关节炎)的单克隆抗体。已经表明利妥昔单抗可促进表达CD20的人淋巴细胞系的抗体依赖性细胞介导细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)(Taylor和Lindorfer，2008年)，并在CD20结合后对细胞通路和细胞膜产生直接影响。已经确定了大量受利妥昔单抗结合影响的事件，包括脂筏修饰、激酶和半胱天冬酶活化，以及对转录因子的影响(Weiner 2010；Bezombes等人，2011)。

除利妥昔单抗外，还描述了其他抗CD20抗体，包括替伊莫单抗、托西莫单抗(两者均与放射性同位素缀合)、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、阿托珠单抗和乌妥昔单抗，它们都是意图用于治疗B细胞淋巴瘤、白血病和B细胞介导的自身免疫病的活性剂(Falchi等人，2018年)。