[发明专利]靶向PD-1和TGFβ的重组蛋白

说明书

本发明公开了一种重组融合蛋白，该重组融合蛋白包含：1)能够结合TGFβ的TGFβR2或其片段，和2)结合PD‑1的抗体或其抗原结合片段。还公开了一种编码该重组融合蛋白的多核苷酸、一种含有该多核苷酸的表达载体、一种制备该重组蛋白的方法以及一种使用该重组蛋白治疗由TGFβ和/或PD‑1过表达引起的疾病的方法。

技术领域

本公开涉及一种靶向PD-1和TGFβ的重组融合蛋白及其制备和用途。

背景技术

根据世界卫生组织的数据，癌症是全球第二大致死病因。据估计，2018年有960万人死于癌症。

癌症实际上是一组涉及异常的细胞生长和分裂的疾病。癌细胞是相当“聪明的”，并且它们已经发展出若干种机制来逃避宿主的免疫监视。例如，它们表达高水平的膜蛋白PD-L1和PD-L2，这两种蛋白结合T细胞表面上的PD-1并诱导T细胞耗竭(Oscar Arrieta等，(2017)Oncotarget 8(60):101994-102005)。癌细胞还提高转化生长因子β(TGFβ)的表达，最常提高TGFβ1的表达，以通过降低CD8⁺T细胞和NK细胞中激活免疫受体NKG2D的表达并抑制NKG2D配体MICA的表达来抑制细胞毒性淋巴细胞和NK细胞的细胞杀伤(Masato Morikawa等，(2016)Cold Spring Harb Perspect Biol 8:a021873；Joan Massague(2008)Cell 134(2):215-230；Paul Spear等，(2013)Cancer Immun.13:8)。

人们已在癌症的早期诊断和适当治疗方面做出了努力，因此与癌症有关的总体死亡率正在下降。目前癌症治疗的选择包括手术、放射疗法、化疗、激素疗法、靶向疗法、免疫疗法等。其中，免疫疗法是一种通过增强免疫应答来帮助免疫系统对抗癌症的治疗。免疫疗法尚未像手术、化疗和放射疗法那样得到广泛应用，但近年来已取得相当大的成功。免疫疗法中使用了靶向免疫抑制途径的药物，例如抗体。

PD-1

PD-1也称为CD279，是一种细胞表面受体。它具有两个配体，即PD-L1和PD-L2。PD-L1的表达响应于LPS和GM-CSF处理在巨噬细胞和树突状细胞上上调，并在TCR和B细胞受体信号传导后在T细胞和B细胞上上调，并且在小鼠心脏、肺、胸腺、脾和肾中检测到了PD-L1mRNA(Freeman GJ等，(2000)Journal of Experimental Medicine 192(7):1027；YamazakiT等，(2002)Journal of Immunology 169(10):5538-5545。PD-L1在肿瘤细胞上也有表达。PD-L2具有更局限的表达谱。

当与PD-L1或PD-L2结合时，PD-1通过抑制T细胞炎性活动下调免疫系统并促进自身耐受性。PD-1对免疫系统的抑制作用可预防自身免疫性疾病。而另一方面，癌细胞中局部PD-L1表达的增加可阻止免疫系统杀伤这些细胞。若干种抗PD-1抗体，诸如(BMS)和(默克)已被证明可以单独或与其他抗肿瘤剂组合用于临床癌症治疗。

TGFβ

转化生长因子β(TGFβ)是一种双功能细胞因子，其具有三种哺乳动物同种型，即TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3。TGFβ与其他因子复合形成丝氨酸/苏氨酸激酶复合物，该复合物结合TGFβ受体并激活下游底物和调节蛋白。在大多数细胞类型中，TGFβ信号传导主要传递强烈的生长抑制活性。例如，TGFβ抑制T淋巴细胞和胸腺细胞的增殖。TGFβ在某些条件下还刺激一些细胞的增殖。例如，TGFβ与IL-2组合诱导Treg细胞分化。癌细胞表达高水平的TGFβ1以抑制免疫功能，同时通过核心途径组分的突变失活或失去信号传导途径的肿瘤抑制臂来使TGFβ的肿瘤抑制作用失效。