[发明专利]用于选择性富集人免疫球蛋白Fc结构域的基于适体的亲和捕获方法

说明书

本发明提供了一种捕获生物流体样本中的人免疫球蛋白Fc结构域的方法。该方法包括提供亲和捕获装置。该亲和捕获装置包括具有适体的表面，该适体固定到该亲和捕获装置的该表面上并与SEQ ID NO 1至少80％相同。用结合缓冲液稀释该生物流体样本。该结合缓冲液包括(A)三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)、三甲胺(TES)、2‑乙磺酸(MES)或4‑(2‑羟基乙基)‑1‑哌嗪乙磺酸(HEPES)；(B)浓度介于约10μM至约20mM之间的镁阳离子；和(C)0至不大于100mM的总一价阳离子浓度。用该结合缓冲液将该生物流体样本中的该人免疫球蛋白Fc结构域吸附到该适体。

相关申请的交叉引用

本专利申请要求于2019年6月26日提交的名称为“Aptamer Based AffinityCapture Methods for the Selective Enrichment of Human Immunoglobulin FcDomains,”的美国临时专利申请号62/866,830的优先权和权益，该专利申请的全部内容据此以引用方式并入。

序列表

本申请包含序列表，其已经以ASCII格式以电子方式提交，并且据此以引用的方式全文并入本文。在2020年6月24日创建的所述ASCII副本命名为W-4126-US02_(102994_1005_3)_SL.txt并且大小为5千字节。

技术领域

本公开涉及用于使用适体来选择性捕获在免疫球蛋白中发现的或包含在人源化单克隆抗体内的人Fc结构域的方法和试剂盒。更具体地，本技术涉及适体配体的经改善的选择性和结合，以更有效地捕获在免疫球蛋白中发现的人Fc结构域。

背景技术

在过去的几十年内，免疫疗法的市场已指数性生长。直至2018年，超过80种抗体治疗剂已经被FDA批准，并且数百个候选者经历临床试验。人单克隆抗体(mAb)表示最常用的抗体治疗方式中的一者，并且提供显著减小的免疫原性风险。约80％的FDA批准的抗体药物是具有超过90％人序列起源的完全人或人源化抗体。为了跟上对人抗体治疗剂需求的这种快速增长，需要高通量、选择性纯化来自细胞培养和生物流体样本的靶蛋白。

发明内容

需要方法和试剂盒，其使用适体来选择性捕获在免疫球蛋白中发现的或包含在人源化单克隆抗体内的人Fc结构域的方法和试剂盒。由于对人抗体治疗剂需求的快速增长，因此本技术的方法高通量和选择性纯化来自细胞培养和生物流体样本的靶蛋白。本技术是稳健的并且有利于人Fc捕获，能够在药代动力学、药效动力学和生物转化研究期间执行详细且准确的分析。

令人惊讶地发现，在用于将适体结合到基底的结合缓冲液中的一价与二价阳离子之间存在竞争作用，以及令人惊讶的发现，即结合缓冲液易受不同阳离子的影响。这些令人惊讶的发现导致常见的缓冲液被从本方法中排除，如下文所详述。本技术的一个益处是，复合基质(例如，生物流体)可以在其一价阳离子浓度下被还原，并且内源性一价离子的负面影响被最小化，这提供了经改善的适体的结合能力而不损失选择性。

在一个方面，本技术涉及一种捕获生物流体样本中的人免疫球蛋白Fc结构域的方法。该方法包括提供亲和捕获装置，该亲和捕获装置包括具有适体的表面，该适体固定到亲和捕获装置的表面上并与SEQ ID NO 1至少80％相同。该方法还包括用结合缓冲液来稀释生物流体样本。结合缓冲液包括(A)三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)、三甲胺(TES)、2-乙磺酸(MES)或4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)；(B)浓度介于约10μM至约20mM之间的镁阳离子；和(C)0至不大于100mM的总一价阳离子浓度。用结合缓冲液将生物流体样本中的人免疫球蛋白Fc结构域吸附到适体。SEQ ID NO 1如下所示。该方法可包括本文所述的实施方案中的一个或多个。

SEQ ID NO 1：