[发明专利]从水溶液中去除去污剂的组合物和方法

说明书

描述了通过添加浓度超过第二去污剂或表面活性剂临界胶束浓度(CMC)的第二去污剂或表面活性剂来去除水溶液中第一去污剂或表面活性剂的组合物和方法。这些组合物和方法特别适用于含蛋白的溶液。典型的第一去污剂/表面活性剂包括聚山梨酯20、聚山梨酯80和TritonX‑100。合适的第二去污剂或表面活性剂可以是离子型、非离子型或两性离子型。典型的第二去污剂/表面活性剂包括但不限于半乳糖苷去污剂(例如辛基‑β‑半乳糖苷)、葡糖苷去污剂(例如MEGA8、MEGA9、MEGA10)、胆酰胺去污剂(例如CHAPS、CHAPSO、BIGCHAPS)和磺基甜菜碱去污剂(例如磺基甜菜碱3‑10)。

本申请要求2019年3月14日提交的申请号为62/818,554的美国临时专利申请的权益。这些以及所有其他引用的外部材料全部通过引用并入本文。如果通过引用并入的引用中术语的定义或用法与本文规定的术语定义不一致或相反，则以本文规定的术语定义为准。

技术领域

本发明的领域是去污剂或表面活性剂的去除，尤其是从药物制剂中去除。

背景技术

以下描述包括可能有助于理解本发明的信息。这并不是承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的发明相关，也不是承认任何具体或隐含引用的出版物是现有技术。

辅料经常被添加到小分子(例如500D)和/或蛋白质溶液(如药物制剂)中，以减少聚集，防止非特异性结合到容器表面，并以其他方式提高稳定性。传统辅料包括蛋白质(如人或牛血清白蛋白、卵清蛋白、免疫球蛋白等)、糖和多糖以及可溶性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)。为了提供非免疫原性制剂，非离子和两性离子去污剂和表面活性剂正越来越多地用于此目的。然而，许多去污剂和表面活性剂会干扰用于此类溶液表征和/或质量控制的分析方法(如免疫测定、基于肽报告的测定、基于细胞的测定、质谱等)。

遗憾的是，一旦引入去污剂和表面活性剂，就很难从溶液中去除。离子交换可用于去除带电(如阳离子或阴离子)去污剂和表面活性剂，但许多常用表面活性剂不带形式上的电荷。疏水性介质可结合大量去污剂和/或表面活性剂，然而，此类疏水性介质也可结合大量目标蛋白(可能以低浓度存在)。透析用于去除去污剂或表面活性剂，但仅部分成功，因为去污剂或表面活性剂与胶束的自缔合减少了可通过透析去除的“溶剂化”表面活性剂或去污剂的量。因此，浓度梯度驱动透析去除去污剂和表面活性剂的速度非常缓慢。胶束的形成还干扰了通过更为活跃的基于尺寸的分离方法(如凝胶过滤和超滤)来去除表面活性剂和去污剂的工作，因为它们的尺寸会导致被超滤膜截留，并从凝胶过滤介质的内部体积中排除。

商用产品可用于去除水溶液中的表面活性剂和去污剂。例如，ThermoFisher公司的HiPPR树脂声称可从低浓度蛋白/肽溶液中去除95％的表面活性剂或去污剂，同时保持蛋白/肽的含量。G Biosciences公司提供了一种去污树脂，该树脂被描述为对大多数表面活性剂具有高亲和力，而对大多数蛋白和肽具有低亲和力。Calbiochem公司提供了一种疏水性CALBIOSORB^TM树脂，用于分批去除表面活性剂，并建议在透析缓冲液中使用该树脂，以避免相关蛋白的非特异性结合。然而，目前尚不清楚这些产品是否能有效去除日益被用作辅料的聚山梨酯表面活性剂，或者在处理后所有蛋白/肽是否保留在溶液中。

在某些应用中，使用有机溶剂(如乙酸乙酯)提取肽溶液。在这种萃取中，相对疏水的去污剂转移到萃取混合物的相对不溶性有机层。然而，由于存在不可逆变性的可能，此类方法通常会随后对蛋白的物理性质进行表征(例如，通过质谱法)，而这可能无法提供有关活性的信息。

因此，仍然需要一种简单方便的方法从水溶液中去除去污剂和/或表面活性剂，同时在溶液中保留功能蛋白和/或肽。

发明内容