[发明专利]三维肌肉组织及其制造方法

说明书

本发明提供一种三维肌肉组织的制造方法，其包括：制作大致长方形的第一细胞模块以及大致长方形的第二细胞模块的工序，所述第一细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个相互平行的大致长方形的孔，所述第二细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个在垂直方向上的与所述第一细胞模块不同的位置相互平行的大致长方形的孔；将所制作的所述第一细胞模块与所述第二细胞模块交替地层叠而得到层叠体的工序；对所得到的层叠体中包含的骨骼肌成肌细胞进行增殖培养的工序；以及将增殖后的骨骼肌成肌细胞向肌管分化诱导的工序。

技术领域

本发明主要涉及一种三维肌肉组织的制造方法。

背景技术

伴随人口增加、新兴国家的收入增加，食用肉的需求正在增大。另一方面，由于作为家畜的饲料的谷物价格的高涨问题、饲养场所的确保问题，难以增加食用肉供给量，寄望于代用肉的开发。

培养肉(三维肌肉组织)是使用通过培养而增加的骨骼肌细胞形成组织而制成的。由于能够在实验室内生产，所以能够不受气候变动影响地进行生产；另外，与传统畜牧业相比，温室效应气体排出量少、环境影响也小。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2018-000194号

专利文献2：日本特许第6427836号

发明内容

发明要解决的问题

为了从细胞制造出牛排肉(steak meat)这样的具有口感的食用肉，需要构建成熟的三维肌肉组织。在再生医学领域中报告了使用人或小鼠的骨骼肌细胞构建三维肌肉组织(专利文献1、2)。但是，专门面向食用的培养肉的条件的研究还不够。

本发明的目的在于提供尤其适合食用的三维肌肉组织的制造方法。

用于解决问题的方法

本发明人鉴于上述问题反复进行专心研究，结果发现了通过如下的制造方法能够解决上述问题。所述制造方法包括如下工序：制作大致长方形的第一细胞模块以及大致长方形的第二细胞模块的工序，所述第一细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个相互平行的大致长方形的孔，所述第二细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个在垂直方向上的与所述第一细胞模块不同的位置相互平行的大致长方形的孔；将所制作的所述第一细胞模块和所述第二细胞模块交替地层叠而得到层叠体的工序；对所得到的层叠体中包含的骨骼肌成肌细胞进行增殖培养的工序；以及将增殖后的骨骼肌成肌细胞向肌管分化诱导的工序。本发明是对上述发现进一步反复进行研究而完成的。

本发明包括如下各项技术方案。

项1.一种三维肌肉组织的制造方法，其包括如下工序：制作大致长方形的第一细胞模块以及大致长方形的第二细胞模块的工序，所述第一细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个相互平行的大致长方形的孔，所述第二细胞模块在水凝胶中包含骨骼肌成肌细胞并且具有多个相互平行的大致长方形的孔，该第二细胞模块的孔的至少一部分在垂直方向上位于与所述第一细胞模块的孔不同的位置；将所制作的所述第一细胞模块和所述第二细胞模块交替地层叠而得到层叠体的工序；以及诱导骨骼肌成肌细胞向肌管分化的工序。

项2.在项1所述的制造方法中，水凝胶包含0.3mg/mL以上胶原。

项3.在项1或2所述的制造方法中，水凝胶包含10～1000μM的抗坏血酸或其盐或其衍生物。

项4.在项1至3中任一项所述的制造方法中，第一细胞模块和第二细胞模块的孔在短边方向上的宽度为200～2000μm。

项5.在项1至4中任一项所述的制造方法中，第一细胞模块和第二细胞模块的相邻的孔的间隔在短边方向上为200～2000μm。

项6.在项1至5中任一项所述的制造方法中，第一细胞模块和第二细胞模块的大小在短边方向上为3mm以上并且在长边方向上为9mm以上。