[发明专利]一种以高纯度叶黄素为主缓解眼疲劳的中药组合物

权利要求书

1.一种以高纯度叶黄素为主缓解眼疲劳的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物的原料药按重量份数计，包括：纯度大于90％的叶黄素40-45重量份、柴胡8-12重量份、菊花3-7重量份、决明子3-7重量份、牛黄1-3重量份、麝香0.1-1重量份、冰片0.1-1重量份、薄荷1-3重量份。

2.根据权利要求1所述的纯度大于90％的叶黄素，其特征在于所述纯度大于90％叶黄素是由万寿菊叶提取得到，提取方式为：

(1)按照10mL/kg的用量将多酶组合溶液均匀喷洒于采摘3天内新鲜万寿菊表面，压实，密闭环境作用7-9天；所述多酶组合物按以下重量分数组合而成：β-1,4-内切木聚糖酶20份，内切β-葡聚糖酶20份、果胶酶45份、角质酶8份；

(2)挤压脱水，60℃热风干燥45分钟至含水量≤15％，得到经处理的万寿菊干花；

(3)将万寿菊干花按照1kg加入正己烷3-5L的量加入正己烷，室温下静态萃取30分钟，收集萃取液；

(4)用真空旋转干燥仪，在45℃、-0.06MPa、30rpm条件下浓缩萃取液至无馏出物，萃取物中含有叶黄素，也含有前提物质α-胡萝卜素；

(5)将得到的万寿菊萃取液按1:2的体积比加入去离子水，所述的混合液按照10ml:1L比例加入破碎的BL21-pETDuet-CitHYb重组菌液；25℃-45℃，120rpm反应24-48h；

(6)静置12h后，分离水相和有机相自动，去除水相，收集有机相。

3.根据权利要求2所述的BL21-pETDuet-CitHYb重组菌液，其特征在于由以下步骤制备得到：

(1)构建工程菌BL21-pETDuet-CitHYb:用共表达载体pETDuet-1表达来源于Citrussinensis的β-胡萝卜素羟化酶，所述β-胡萝卜素羟化酶序列如SEQ ID NO:1所示，重组菌构建以BL21为表达菌株，pETDuet-1为表达载体，将β-胡萝卜素羟化酶基因整合到pETDuet-1多克隆位点，构建pETDuet-CitHYb整合载体，转化BL21菌株，完成重组菌构建；

(2)重组酶表达：在步骤(1)得到的重组菌中加入终浓度0.1mM的IPTG诱导，30℃诱导4小时；

(3)诱导完成后，离心收集菌体，菌体用pH 7.0的PBS缓冲液重新悬浮后用超声波破碎仪进行细胞破碎，既得重组菌液。

4.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于由以下方式制备得到：将8倍药物质量当量的水与中药组方混合，合并煎煮5h，过滤，得滤液，浓缩至1.2倍浸膏，加入70％的乙醇，过滤，滤液回收乙醇，既得。

5.权利要求1所述的中药组合物在缓解眼睛疲劳的应用。