[发明专利]含有特异性分子靶标的金黄色葡萄球菌标准菌株及其检测和应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具有涉及4株我国自主知识产权的、符合国内传播规律的金黄色葡萄球菌标准菌株，可用作食品、药品、临床检验等不同领域的标准参考菌株。其保藏编号分别为GDMCC 60841、GDMCC 60843、GDMCC 60844和GDMCC 60845。本发明的4株金黄色葡萄球菌菌株，具有标准的葡萄球菌菌体显微形态和生理生化特征，遗传背景清晰，且耐药性、毒力基因和分子检测靶标等信息清晰。本发明还涉及一组用于检测、鉴别上述4株金黄色葡萄球菌标准菌株的特异性靶标基因以及对应的PCR引物。最后，本发明还提供了一种存活率高、特异性的金黄色葡萄球菌冻干保护剂，可用于本发明标准菌株的长期储存。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及含有特异性分子靶标的金黄色葡萄球菌标准菌株及其检测和应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起细菌性食物中毒的重要食源性致病菌之一，在我国，20～25％的细菌性食物中毒病例是由金黄色葡萄球菌引起的。金黄色葡萄球菌可产生多种毒素，有些毒素可耐高温，人体摄入几微克便可导致食物中毒；有的毒素可以导致人的白细胞和巨噬细胞的损坏，有的可以导致血液中的纤维蛋白沉积，严重时还可导致中毒性休克综合征、骨髓炎、化脓性心内膜炎、菌血症及致死性肺炎等多种感染，威胁人类健康。了解该菌的传播规律以及致病性进化是有效防控该菌所致的食源性疾病的基础，而是否使用了合适的标准菌株决定了研究结果的可靠性。

目前研究该菌的进化规律和致病性使用的标准菌株大部分为国外临床来源的菌株，并不能很好地反映该菌在食品中的传播特征，中国作为世界重要的食品消费国，食品中金黄色葡萄球菌的检出率一直处于不低的水平，却缺乏代表性的分离株作为具有自主知识产权的标准菌株来研究该菌在中国食品中的遗传结构和传播规律。

目前报道的所采用的保护剂基本用于定性储存金黄色葡萄球菌，在保质期内能够保证还有活菌存在即可。如薛蕾等人采用可溶性淀粉、脱脂奶粉、海藻糖、麦芽糊精、谷氨酸钠、抗坏血酸钠、磷酸盐缓冲液作为金黄色葡萄球菌冷冻干燥保护剂制备能力验证样品，其冻干存活率仅为51.74％，且不能定量储存。又如中国专利CN106497791 A采用2％-6％海藻糖,谷氨酸钠12％-18％，L-半胱氨酸盐酸盐0.5％-1.5％，牛血清白蛋白0.25％-0.75％可使金黄色葡萄球菌冻干存活率达99.82％，但该保护剂并未进行长期储存的考察。又如中国专利CN102140423 B采用0.1～10质量份的水溶性糖、0.1～5质量份的脱脂奶粉、0.1～20质量份的明胶、0～10质量份的活性炭作为定量化保存的保护剂，该保护剂并没有提到冻干存活率的高低，且由于保护剂中含有一定浓度的明胶，在常温条件下或在冬天使用时其溶解度受到影响，溶解速度较慢；此外该保护剂中含有活性炭，活性炭不溶于水溶液，冻干后沉在瓶底，且复苏时，散落在平板表面，影响美观以及菌落的自动计数。因此，提供一种可长期保存定量化金黄色葡萄球菌的冻干保护剂具有重要意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供了4株金黄色葡萄球菌标准菌株及其应用。本发明提供的4株中国地区食源性金黄色葡萄球菌分离菌株，具有典型的金黄色葡萄球菌生理生化特性，且样品来源、遗传背景、耐药性、毒力基因和分子检测靶标等信息清晰，能较好地反映该菌在中国地区的遗传背景。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

提供一株金黄色葡萄球菌，是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Sta3702B3，分离自鸡翅样品，其分类命名为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，已于2020年1月8号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60841。

提供一株金黄色葡萄球菌，是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Sta403，分离自牛肉样品，其分类命名为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，已于2019年10月27号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60843。