[发明专利]一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法

说明书

本发明涉及一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP‑1118的生物分析方法，通过LC‑MS/MS对临床研究受试者血浆中非达霉素及代谢物OP‑1118进行分析。本发明方法优选采用液‑液提取预处理方法，以非达霉素‑d7为内标，采用XSelect CSH C18柱色谱柱，梯度洗脱，电喷雾电离源串联质谱检测，本发明操作简便、灵敏度高，满足临床研究大批量样品分析需求。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法。

背景技术

非达霉素为一种大环内脂类窄谱抗生素。对梭菌属菌有明显抑制作用，临床用于治疗艰难梭菌相关性腹泻。非达霉素片，由美国Optimer公司开发，2011年5月在通过FDA获批上市。为了支持非达霉素的临床研究以及仿制药在国内的研发，需要一种检测人血浆样品中非达霉素浓度的方法。目前尚相关技术披露用于检测非达霉素在生物基质中的浓度。液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)由于其极佳选择性、检测灵敏度、以及分析通量，被广泛的用于生物基质中药物浓度测定。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法，包括以下步骤：

预处理，在离心管中加入血浆，加入内标溶液，加入超纯水和乙酸乙酯，涡流及离心后取上清液到另一干净96孔板中，加入超纯水，涡流振荡，静置后，取上清吹干后，用甲醇-水(1:1，v/v)复溶，进样10.00μL；

色谱，将待测样品液相色谱分离，采用XSelect CSH C18色谱柱，梯度洗脱，流动相A为含0.05％氨水的5mM醋酸铵水溶液，流动相B为甲醇，色谱运行时间5min；

质谱，采用电喷雾离子源，负离子检测，喷射电压-4500V，气体1(Gas1)65psi，气体2(Gas2)65psi，气帘气体(Curtain Gas)35psi，离子源温度500℃，碰撞诱导解离9psi，驻留时间150ms，碰撞能量(CE)-43eV，去簇电压(DP)-80V，非达霉素定量分析离子对m/z 1055.5→231.0，OP-1118定量分析离子对m/z 985.3→231.0，非达霉素-d7定量分析离子对m/z1062.5→231.0。

优选地，所述的一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法，所述预处理步骤，向50.0μL血浆样品中加入50.0μL内标溶液、200μL水溶液和800μL乙酸乙酯，涡流振荡5min，静置5min；取700μL上清吹干后，用300μL甲醇-水(1:1，v/v)复溶。

优选地，所述的一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法，所述内标溶液为浓度为3.00ng/mL非达霉素-d7溶液。

优选地，所述的一种人血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的生物分析方法，所述色谱步骤，色谱柱类型为XSelect CSH C18。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

1、本发明为目前唯一披露的测定血浆中非达霉素及其代谢物OP-1118的分析技术，可用于支持非达霉素临床研究工作。

2、本发明操作简便、采用液-液提取法可最大程度降低基质效应，增强方法的耐用性。

3、本发明灵敏度较高、非达霉素和OP-1118定量下限分别为0.100和/0.200ng/mL，检测限经计算均约为2.14pg/mL，检测限柱上待测物的量按照稀释倍数6以及进样量10μL计算为3.57fg。