[发明专利]用于检测脂溶性维生素的试剂盒和检测方法

权利要求书

1.用于检测脂溶性维生素的试剂盒，其特征在于，包括：至少三瓶脂溶性维生素校准品、至少三瓶脂溶性维生素质控品、混合内标蛋白沉淀剂、流动相添加剂以及用于提取待处理样品中的脂溶性维生素的提取液；其中，

所述至少三瓶脂溶性维生素校准品和所述至少三瓶脂溶性维生素质控品均为脂溶性维生素的冻干品，其中，脂溶性维生素包括维生素A、维生素E、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、维生素K1和维生素K2；

所述混合内标蛋白沉淀剂包括：含有蛋白沉淀剂、维生素A-d3内标物、维生素E-d6内标物、25-羟基维生素D2-d3内标物、25-羟基维生素D3-d6内标物、维生素K1-d7内标物和维生素K2-d7内标物的混合溶液；

所述流动相添加剂包括含有甲酸的甲醇溶液以及含有甲酸的乙腈溶液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

所述蛋白沉淀剂包括：乙醇溶液和/或甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

所述流动相添加剂包括：含有4％-10％甲酸的甲醇溶液和含有6％-15％甲酸的乙腈溶液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

所述提取液包括：含有0.5％-3％乙醇的正己烷溶液或含有0.5％-3％乙醇的甲基叔丁基醚溶液。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括：

复溶液包括：含有0％-30％水的乙腈溶液。

6.基于权利要求1至5中任一所述的试剂盒的脂溶性维生素的检测方法，其特征在于，包括：

分别向所述试剂盒中的至少三瓶脂溶性维生素校准品中加入水溶液复溶，得到至少三种浓度的标准工作液；

分别向所述至少三种浓度的标准工作液中加入所述试剂盒中的混合内标蛋白沉淀剂，得到至少三种浓度的标准溶液，其中，所述至少三种浓度的标准溶液中的所述混合内标蛋白沉淀剂的量相同；

利用所述试剂盒中的所述流动相添加剂配制流动相；

利用液质联用仪和所述流动相在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；

根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中的每一种脂溶性维生素的浓度以及所述混合内标蛋白沉淀剂中每一种脂溶性维生素的内标物的浓度，拟合每一种脂溶性维生素所对应的标准曲线方程；

利用所述试剂盒中的至少三瓶脂溶性维生素质控品确定所述标准曲线方程的斜率和截距是否分别在预设的范围内；

如果是，对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；

向所述第一上清液内加入萃取剂、所述试剂盒中的提取液和所述混合内标蛋白沉淀剂，涡旋混匀并离心，取离心后的上层溶液作为待测样品；

利用液质联用仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；

基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中每一种脂溶性维生素的浓度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述利用所述试剂盒中的所述流动相添加剂制备流动相，包括：

当所述试剂盒中的所述流动相添加剂包括含有4％-10％甲酸的甲醇溶液和含有6％-15％甲酸的乙腈溶液时，

将含有4％-10％甲酸的甲醇溶液加入到甲醇溶液中，得到流动相A，并将含有6％-15％甲酸的乙腈溶液加入到含有乙腈的甲醇溶液中，得到流动相B，其中，流动相A和流动相B采用梯度洗脱。