[发明专利]一种基于荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的引物探针组、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组为根据HPIV特异性基因序列HN设计的引物和探针，其中，

HPIV1引物和探针序列为：

HPIV1-F：

5’-TGTTCTGTAATAGCTGCAGGAACAAGGGGTTACCA-3’；

HPIV1-R：

5’-ACATTTGCTTATCACACACTTGGTGTTGCCTTGGA-3’；

HPIV1-P：

5’-ATGCTCCTTGCCCACTGTGAATGAGACTACAGA(FAM-dT)(THF)AC(BHQ-dT)CGAGTGAAGGTATAGA(C3-spacer)-3’。

HPIV2引物和探针序列为：

HPIV2-F：

5’-CACTGGAATTGTAGGTTCAGATGCCATTGCTGGAG-3’；

HPIV2-R：

5’-GCATCTAGACTGGTGATGTTGCATGTTCCATTGCT-3’；

HPIV2-P：

5’-CACTCATGTACTACACTGATGGTGGCGCTAGC(HEX-dT)(THF)(BHQ-dT)ATTGTTGTAAAATTA(C3-spacer)-3’。

HPIV3引物和探针序列为：

HPIV3-F：

5’-ACGGATGTATACCAACTGTGCTCAACTCCCAAAGT-3’；

HPIV3-R：

5’-TGGACTATGAGATGCCTGATTGCAGTCTCTCTGTG-3’；

HPIV3-P：

5’-TGCGGCATTATACCCATCTGTTGGACCAGGGAT(ROX-dT)A(THF)AC(BHQ-dT)ACAAAGGCAAAAT(C3-spacer)-3’。

2.如权利要求1所述的一种荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水。

3.如权利要求2所述的一种荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应试剂包括根据HPIV特异性基因序列HN设计的引物和探针、M-MLV逆转录酶、大肠杆菌RecA蛋白、UvsY蛋白、单链结合蛋白GP32、Bst聚合酶、核酸外切酶III、聚环氧乙烷、海藻糖、甘露醇、ATP、dNTPs、肌酸激酶和磷酸肌酸。

4.如权利要求3所述的一种荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应试剂为干粉且单管分装。

5.如权利要求4所述的一种荧光RMA法多重检测人副流感病毒亚型的试剂盒，其特征在于，所述标准阳性质粒为HPIV1的HN基因片段与pMD18-T载体相连接后得到的重组质粒。