[发明专利]一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP-KP-20005及其应用

说明书

本发明公开了一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP‑KP‑20005，其宿主为克雷伯菌BK‑20005，该噬菌体头部为廿面体，长度为92.281nm，且立体对称，短尾，尾部长度为107.442nm，为有尾噬菌体目短尾噬菌体科，基因全长48585bp，不具有毒力基因和溶原性基因，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物学中心，保藏日期为2020年12月17日，保藏编号CGMCC No.21408。该噬菌体能够有效分解肺炎克雷伯菌，可有效快速杀死裂解细菌，防控肺炎克雷伯菌的传播与增殖。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP-KP-20005及其在禽病防控中的应用。

背景技术

随着集约化养禽业的发展,一些常见的急性传染病已能被人们用疫苗和药物加以控制,而一些以往认为不重要的病原或条件致病菌则逐渐上升为家禽的重要致病原，引起家禽大批发病和死亡。例如近年来报道比较多的鸡大肠杆菌病,鸡的奇异变形杆菌病等。而由肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)侵袭种鸡生殖和消化器官能引起种蛋带菌导致死胚，幼雏带菌或小鸡直接感染而引起腹泻和肠炎败血症死亡，本病发病率为38～46％，死亡率达32％。雏鸭、雏鸡在10～15日龄易感。

克雷伯氏杆菌是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。克雷伯氏菌对鸡的感染除了能水平传播外，带菌种鸡还可以通过鸡蛋垂直传给子代。该菌属于肠杆菌科,克雷伯氏菌属的成员，可致人和动物发生肺炎，肠炎，子宫炎，腹膜炎，甚至败血症。因此，随着近年来环境的变化，该菌成为人兽共患病的病原已被重视。广谱抗生素的滥用使得肺炎克雷伯菌的耐药菌株增多，从而造成了普通抗生素难以治愈肺炎克雷伯菌感染引起的疾病的严重后果，这使我们又重新对噬菌体安全有效的治疗多重耐药性的病原菌产生了兴趣。噬菌体是一种细菌病毒，在自然界中具有较高的丰度，具有宿主专一性强，不会破坏微生态环境。噬菌体侵染宿主菌后，裂解时会释放出新的噬菌体，而少量的噬菌体就能起到防治的效果。因此，噬菌体可以特异性的快速杀死裂解细菌的能力使他们在不久的将来可被当作抗菌药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP-KP-20005，旨在解决养殖场禽类因感染肺炎克雷伯菌，发病急而治疗不及时，且因致病菌耐药性而导致用药无效等问题。

本发明的另一目的在于提供该噬菌体在治疗禽源克雷伯菌病中的应用，RDP-KP-20005具有较高的温度耐受性和较宽的酸碱耐受范围，效价较高，安全有效，有利于工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP-KP-20005，其宿主为肺炎克雷伯菌BK-20005，透过电镜观察，该噬菌体头部为廿面体，长度为92.281nm，且立体对称，短尾，尾部长度为107.442nm，为有尾噬菌体目短尾噬菌体科，基因全长48585bp，不具有毒力基因和溶原性基因，该噬菌体于2020年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.21408。

进一步地，该噬菌体在pH在6-9范围内能维持较好的活性，其效价在5.9×10⁶pfu/mL之上，在pH为7时，效价最高，适宜生长在中性环境中；在pH＝12以及pH＝2时，仍有噬菌体存活，该噬菌体的酸碱耐受范围宽。

进一步地，该噬菌体的最适温度为37℃，效价最高达到10¹⁰pfu/mL，在70℃的条件下作用60min，效价维持在10⁵pfu/mL，依然具有生物活性，对温度有较好的耐受性。

本发明还提供了裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体RDP-KP-20005在制备预防和或治疗禽源肺炎克雷伯菌引起的疾病的药物中的用途。