[发明专利]一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法

权利要求书

1.一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法，其特征在于，包含以下操作步骤：

(1)取藻粉，加入PBS缓冲液，冷冻，融解，反复冷冻、融解，超声裂解藻体，得到藻细胞破碎液，离心所得藻细胞破碎液，取上清液，用硫酸铵在过夜盐析至饱和度，离心，收集沉淀获得粗蛋白，向粗蛋白中加入PBS缓冲液溶解粗蛋白，透析脱盐后真空冷冻干燥，得到富硒螺旋藻总蛋白粉末；

(2)称取步骤(1)所得富硒螺旋藻总蛋白粉末至PBS缓冲液，溶解，超声促溶后离心，再过滤上清液，收集滤液获得富硒螺旋藻蛋白溶液；

(3)选择弱阴离子DEAE作为离子交换剂，用PBS缓冲液平衡层析柱，将40mL3.0mg/mL富硒螺旋藻蛋白溶液上柱，先用PBS缓冲液洗脱结合柱子，再依次分别用0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS缓冲液梯度洗脱分离样品，以洗脱体积为横坐标，波长280nm处吸光度为纵坐标，绘制蛋白洗脱曲线，收集同一个NaCl-PBS缓冲液洗脱梯度的样品作为一个组份，即0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS分别对应Se-SP1,Se-SP1,2,Se-SP3,Se-SP4,Se-SP5，即可分离出5个蛋白组，浓缩、透析脱盐，真空冷冻干燥，得到纯化的含硒蛋白组份；

其中，步骤(1)中所述的冷冻温度为-20℃，时间为3h；所述超声裂解时间为30min；所述离心皆为10000rpm、4℃离心30min；所述PBS缓冲液的摩尔浓度为0.1M，内含2％聚乙烯吡咯烷酮和0.5％二硫苏糖醇，pH值为6.8；

其中，步骤(2)中所述离心转速≥8000rpm，4℃离心20min；

其中，步骤(2)、步骤(3)中所述PBS缓冲液皆为同一规格，所述PBS缓冲液浓度为50mM，pH为7.0，不含有2％聚乙烯吡咯烷酮和0.5％二硫苏糖醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中5g藻粉加入100mLPBS缓冲液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中冷冻干燥时间为36h，温度-25℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中0.2g富硒螺旋藻总蛋白粉末加入50mLPBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中4℃下充分溶解30min，超声促溶5min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中所述梯度洗脱分离样品的流速1mL/min。