[发明专利]土壤中抗生素的检测方法

说明书

本发明公开了一种土壤中抗生素的检测方法，抗生素为30种抗生素，依次进行以下步骤：(1)土样预处理；(2)提取净化：利用预处理后土壤进行两步式提取，得提取液；向提取液中加入萃取剂，得到有机相；向有机相中加入氢氧化钠溶液，摇匀后加入净化剂；取净化后上清液；氮吹尽干，溶解，过滤膜；(3)超高效液相色谱—串联质谱联用定量检测抗生素浓度。本发明能够满足土壤中多种抗生素残留分析监测要求。

技术领域

本发明属于分析技术领域，具体涉及一种同时测定土壤中四环素、磺胺、喹诺酮、大环内酯等30种抗生素的分析方法。

背景技术

土壤抗生素含量直接影响到土壤环境质量和种植植物的安全。目前全球至少有70％左右的抗生素被用于畜牧业和水产养殖业，这些抗生素大多不能被动物完全吸收，以母体或代谢物的形式排出动物体外的抗生素约占用药量的40～90％，其中未经处理的畜禽粪便作为有机肥农用是抗生素进入农田土壤环境的主要途径之一。由于多数抗生素其结构的稳定性以及反复使用，进入土壤后，因其可以改变并增强土壤某些微生物种群的抗性基因，使之成为潜在的环境生态学危害。另一方面，由于常用的抗生素药物较之农药、多环芳烃等其它土壤环境污染物有较强的水溶性，因此这些抗生素在土壤中容易随水流在土壤中垂直渗透而进入地下水循环系统，从而对整个生态圈及人们日常饮食造成潜在的不利影响。此外，国内外最新研究表明农田环境中抗生素污染对植物有毒害作用，并能被作物吸收累积，通过食物链危及农产品安全和人体健康。

不同种类抗生素理化性质差异较大，土壤基质较为复杂，抗生素在土壤中的吸附作用加大了抗生素从土壤中的萃取难度，同时土壤有机质的存在也提高了样品的净化要求。目前常见的土壤抗生素分析主要有固相萃取、加速溶剂萃取结合液相色谱、液相色谱-质谱联用等技术。QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)，是一种用于农产品农药检测的快速样品前处理技术，近年来也会用于农产品中抗生素的前处理。

发明内容

本发明要解决的问题是提供了一种灵敏度高、重现性好的土壤中30种抗生素的检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种土壤中抗生素的检测方法，抗生素为30种抗生素，依次进行以下步骤：

(1)土样预处理：

土壤冷冻干燥(-50℃干燥96h)，研磨后过筛(过2mm筛)；

(2)提取净化：

2.1)、利用步骤(1)所得的土壤进行两步式提取，得提取液；

2.2)、向步骤2.1)所得的提取液中加入萃取剂，得到有机相；向有机相中加入氢氧化钠溶液，摇匀后加入净化剂；取净化后上清液；氮吹尽干，溶解，过滤膜(0.22μm滤膜)；

(3)超高效液相色谱—串联质谱联用定量检测抗生素浓度。

作为本发明的土壤中抗生素的检测方法的改进：所述步骤2.1)的两步式提取为：

第一步提取：

在1.0g步骤(1)所得的土壤中，加入5mL甲醇/乙腈混合溶液(1:1)及50μL甲酸，涡旋提取后，离心，取上清液；

所述甲醇/乙腈混合溶液中，甲醇：乙腈＝1:1的体积比；

第二步提取：

在第一步提取的离心所得的沉淀中加入5mL乙腈-McIlvaine缓冲液(pH＝4)混合液，涡旋提取，离心，取上清液；

所述乙腈-McIlvaine缓冲液(pH＝4)混合液由乙腈与McIlvaine缓冲液(pH＝4)按照1:1的体积比混合而得；

将第一步提取所得的上清液与第二步提取所得的上清液进行合并，得提取液。