[发明专利]大鼠子宫内膜深度损伤模型的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种大鼠子宫内膜深度损伤模型的构建方法及其应用，涉及医疗模型技术领域，选用雌性SD大鼠﹐取动情期的大鼠进行手术造模。模拟与妇产科临床相似的刮宫损伤过程，环绕搔刮子宫内膜，直至刮出大量内膜且自觉宫腔粗糙，缝合子宫切口。用血管钳夹闭造模侧子宫两端，再用1mL注射器缓慢注入10mg/L脂多糖溶液0.3～0.5mL，保持宫腔处于充盈状态，30min后抽出脂多糖溶液，松开血管钳行子宫缺血再灌注。生理盐水冲洗腹腔关腹，缝合皮肤。常规饲养，经过两个动情周期，取动物子宫组织进行检测。检测机械损伤联合脂多糖灌注和缺血再灌注构建的SD大鼠子宫内膜损伤模型简便可行，可用于子宫内膜损伤发病机制、预防和药物干预治疗研究。

技术领域

本发明涉及医疗模型技术领域，是建立具有妇产科临床特点子宫内膜深度损伤模型的方法。

背景技术

育龄夫妇生殖健康问题却成了人口调整战略的一大阻碍，不孕不育发病率约为12.5％-15％，并有逐渐上升趋势。在这其中，子宫环境功能改变不仅引起了女性不孕，更是造成自然流产、出生缺陷等不良妊娠结局的重要原因。子宫内膜是一个高度再生的组织，在月经周期中进行动态性，周期性的生长、分化、脱落和再生。子宫内膜作为胚胎发育的“土壤”，其再生对胚胎的着床和妊娠的维持至关重要。由于频繁的宫腔操作史、感染及部分药物的使用，子宫内膜损伤的发生逐渐增多，特别是子宫肌瘤剔除，子宫内膜炎或反复流产后清宫等导致的子宫内膜基底层破坏，造成子宫内膜重度损伤，再生修复困难，常引起子宫前后壁之间纤维瘢痕和子宫内膜粘连(Intrauterine adhesion，IUA)的形成。临床上可表现为，月经减少，闭经，不孕，习惯性流产，早产和胎盘异常等。有研究表明，近三分之二的胚胎种植失败是由于内膜因素所致。因此，对于重度子宫内膜损伤的治疗是临床上亟待解决的问题。因此对于子宫内膜损伤 (包括IUA患者)，急需探索新的方法，修复和重建受损的子宫内膜，改善妊娠结局以及降低复发几率。本发明旨在建立一个模拟人体子宫内膜深度损伤的动物模型，为后续深入研究子宫内膜损伤的发病机制以及探索对其有效的治疗方案打下基础，具有重要的科学价值和临床意义。

发明内容

本发明的目的在于建立一个模拟人体子宫内膜深度损伤的动物模型，为后续深入研究子宫内膜损伤的发病机制以及探索对其有效的治疗方案打下基础。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种大鼠子宫内膜深度损伤模型的构建方法，该方法包括以下步骤：

步骤1、选用性成熟为交配雌性SD大鼠，每天进行大鼠阴道细胞涂片确定动情周期，选取动情期大鼠并分为模型组和假手术组；

步骤2、对模型组中的大鼠麻醉后，从尿道口上端3cm处正中纵向切开皮肤 2～3cm，逐层分离进入腹腔，找到子宫并采用刮宫器进行刮宫，其中以相同的力度和搔刮次数分别对各个大鼠左侧子宫进行损伤，然后再用注射器注入10mg/L 脂多糖溶液，保持宫腔处于充盈状态，30min后抽出，对所有大鼠的右侧子宫剪开后缝合，不予搔刮；对假手术组中的大鼠的两侧子宫均只做手术切口后缝合，不做其它任何处理；

步骤3、步骤2完成后，经过两个动情周期，对各组大鼠取子宫组织进行 4％多聚甲醛固定，石蜡切片包埋，HE染色，Masson染色，免疫组织化学染色检测子宫内膜变化情况。

进一步，步骤1中选用的SD大鼠均为8-12周龄，体重220g-240g。

进一步，步骤1中进行大鼠阴道细胞涂片的时间为每天上午8-10点。

进一步，步骤2中大鼠麻醉前需禁食12小时，且麻醉具体为按照3mL/kg 剂量腹腔注射10％水合氯醛麻醉，然后仰卧位固定在动物解剖台上，腹部皮肤常规消毒后进行皮肤切开。