[发明专利]一种基因治疗载体及其用途

权利要求书

1.一种基因治疗载体，其包括：

a）5′LTR；

b）Psi(ψ)包装信号；

c）逆转录病毒输出元件；

d）中心多嘌呤区/中央终止序列；

e）与编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子；

f）编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸；

g）转录后调控元件；以及

h）3′LTR。

2.根据权利要求1所述的基因治疗载体，其中，所述基因治疗载体为γ逆转录病毒载体、腺关联病毒载体、腺病毒载体或疱疹病毒载体。

3.根据权利要求1所述的基因治疗载体，其中，所述基因治疗载体为慢病毒载体。

4.根据权利要求3所述的基因治疗载体，其中，所述慢病毒选自以下：人类免疫缺陷病毒、维斯纳-梅迪病毒、山羊关节炎-脑炎病毒、马传染性贫血病毒、猫免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒或猿猴免疫缺陷病毒。

5.根据权利要求4所述的基因治疗载体，其中，所述慢病毒为人类免疫缺陷病毒。

6.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，还包括编码表达标签的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的基因治疗载体，其中，所述表达标签为截短的表皮生长因子受体、萤火虫荧光素酶、增强的绿色荧光蛋白、链霉亲和素结合肽标签或Flag标签。

8.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述5′LTR的启动子由选自以下的异源启动子替换：巨细胞病毒启动子、劳斯肉瘤病毒启动子或猿猴病毒40启动子。

9.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述3′LTR包括一个或多个修饰。

10.根据权利要求9所述的基因治疗载体，其中，所述3′LTR包括防止病毒转录超出第一轮病毒复制的一个或多个缺失。

11.根据权利要求10所述的基因治疗载体，其中，所述3′LTR包括3′LTR的U3区域中TATA框以及Sp1和NF-κB转录因子结合位点的缺失。

12.根据权利要求11所述的基因治疗载体，其中，所述3′LTR是自身失活LTR。

13.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述与编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子包括：短延伸因子1α启动子或其转录活性片段、骨髓增生性肉瘤病毒增强子阴性对照区域缺失并且dl587rev引物结合位点取代的启动子或其转录活性片段。

14.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述与编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸可操作地连接的启动子选自以下：跨膜蛋白119、整合素亚单元αM、CD45、离子钙结合衔接分子1、C-X3-C基序趋化因子受体1、粘附G蛋白偶联受体E1、CD68或CD40。

15.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述转录后调控元件包括土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件。

16.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述集落刺激因子1受体多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

17.根据权利要求1或2所述的基因治疗载体，其中，所述编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

18.根据权利要求17所述的基因治疗载体，其中，所述编码集落刺激因子1受体多肽的多核苷酸是经过密码子优化的表达序列，如SEQ ID NO：4所示。