[发明专利]用于纯化核酸探针的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法

说明书

本发明公开了用于纯化核酸探针的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法，涉及分子生物与生物化学技术领域。本发明公开的纯化膜包括过滤膜和结合在过滤膜上用于去除核酸探针中的非特异性重复序列的锚定成分，本发明提供的纯化膜可在针对核酸探针纯化的同时消除核酸探针中的非特异性重复序列，降低非特异性背景信号的核酸探针，并有效提高核酸探针的纯度。

技术领域

本发明涉及分子生物与生物化学技术领域，具体而言，涉及用于纯化核酸探针的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法。

背景技术

基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩瀚的基因组中把目的基因显示出来。根据核酸分子探针的来源及其性质可分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核苷酸探针等。

基因组DNA探针，作为常用的核酸探针之一，为长度在几十到几百甚至上千碱基对的单链或双链DNA，用特殊示踪剂进行标记，在适当的pH值、温度和离子强度下，DNA杂交利用分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，能与待检测样本中互补的非标记单链DNA或RNA以氢键结合，形成双链复合物。其多采用分子克隆从基因文库筛选或用PCR技术扩增制备。由于真核生物基因组中存在高度重复序列，因而在制备探针时经常会由于选用基因片段含有重复序列的情况，从而产生非特异性杂交而出现假阳性结果。

随着人类基因组计划的完成，原则上检测任何基因的核酸探针均可被设计得到，但由于DNA重复序列广泛存在于真核生物的基因组中，整个人类基因组的80％每隔几个Kb就出现一次重复序列，而剩下的20％则主要由一些串联重复DNA所组成。因此，在分子克隆操作过程中，当采用含有重复序列的探针来进行FISH检测时，存在于探针中的重复序列将会产生广泛的非特异性的强杂交背景信号，从而使得部分待检测的低拷贝或单拷贝序列的杂交信号被干扰或掩盖。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供用于纯化核酸探针的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法。本发明提供的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法可在针对核酸探针纯化的同时消除探针中的非特异性重复序列，降低核酸探针的非特异性背景信号，并有效提高核酸探针的纯度。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供一种用于纯化核酸探针的纯化膜，其包括过滤膜和结合在所述过滤膜上用于去除核酸探针中的非特异性重复序列的锚定成分。

本发明提供的纯化膜通过在过滤膜上结合的锚定成分，在用于纯化核酸探针的同时，可去除核酸探针中的非特异性重复序列，进而降低非特异性背景信号，并有效提高核酸探针的纯度。

其中，锚定成分可以根据待杂交的基因的种属来源进行设计。例如在一些实施方案中，锚定成分可以是人类cot-1DNA。这样使得所用的核酸探针在用于与人类基因组杂交的时候，可降低非特异性背景信号。再如，待杂交的基因来自其他动物如小鼠，那么锚定成分可以根据小鼠基因组的特点进行设计，以使在纯化的同时去除核酸探针的非特异性重复序列，降低核酸探针在与小鼠基因组杂交时的非特异性背景信号。

非特异性重复序列通常是指生物基因组序列中重复出现的碱基序列，这类序列与其他碱基序列的非特异性结合概率非常高。因此探针中如果存在非特异性重复序列会导致背景信号增强，影响杂交结果，需要将其去除。

可选的，在一些实施方案中，锚定成分为人类cot-1DNA。

可选的，在一些实施方案中，所述过滤膜为玻璃纤维素膜或变性硅胶膜。

可选的，在一些实施方案中，所述变性硅胶膜为硅烷化硅胶膜或羧基化硅胶膜。