[发明专利]测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法

权利要求书

1.一种测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）样品前处理

a、称取待测样品2-10g，加水溶解，混合均匀；

b、调节样品溶液酸度至pH4.3±0.2，静置，涡旋；

c、转移全部样品溶液至容量瓶中，加水定容至20-100mL，混匀，过滤；

d、吸取5-10mL样品滤液加载至免疫亲和柱上，用水淋洗，排空残留液，甲醇洗脱，重复洗脱2次，合并洗脱液；

所述免疫亲和柱型号为EASI-EXTRACT ®VITAMINE B12 P80，柱容量1μg，样品过柱速度不超过2mL/min；

e、洗脱液氮吹至干，复溶0.5-1mL，待上机分析；

其中，定容体积与待测样品称样量比例为10mL:1g，复溶体积与吸取样品滤液的体积比为1:10；

保证复溶样品溶液中所含样品量与定容体积比为1g：1ml；

（2）进行高效液相色谱分离，配有高灵敏度流通池二极管阵列检测器测定；

所述高灵敏度流通池为Thermo LightPipe HighSens 60mm流通池；

二极管阵列检测器条件为：

检测波长：361 nm，带宽8nm；

参比波长：450nm；带宽40nm，

该方法的检出限为0.1μg/kg；

其中，高效液相色谱分离条件为：

色谱柱：Agilent Poroshell 120 HILIC-Z ，4.6×150 mm, 2.7μm ；

流动相：A: 采用0.5%乙酸调节pH至4.6的100mmol/L 乙酸铵溶液，B：乙腈；

等度洗脱，A：B=25:75；

流速：0.6~1.0mL/min；

进样量：60~100 μL；

柱温：25~40℃。

2.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，采用浓度为0.5~1mol/L的稀盐酸调节样品溶液酸度。

3.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，所述过滤采用中速定性滤纸或中速定量滤纸过滤。

4.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，定量限为0.3μg/kg。

5.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，步骤（1）中a子步骤中，采用涡旋和超声处理的方式进行所述混合均匀处理。

6.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，步骤（2）中高效液相色谱分离条件中，柱温为35℃。

7.根据权利要求1所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，所述婴幼儿食品和乳品为婴儿米粉、婴儿面条、婴幼儿配方奶粉、乳基婴幼儿食品或豆基婴幼儿配方食品。

8.根据权利要求7所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，测定的婴幼儿食品含有淀粉时，步骤（1）中a子步骤中，进行混合均匀处理前，还包括用淀粉酶酶解的步骤。

9.根据权利要求8所述的测定婴幼儿食品和乳品中维生素B12添加量的液相色谱法，其特征在于，酶解的条件为，每2g待测样品对应加入0.5gα-淀粉酶，37℃下酶解30min。