[发明专利]一种抑制HIS1基因表达的RNAi植物表达载体及其应用

权利要求书

1.一种抑制HPPD抑制剂敏感型1基因表达的RNAi植物表达载体，其特征在于，含有发卡结构表达盒，其中所述发卡结构表达盒含有由SEQ ID No.1-3所示的DNA片段所形成的发卡结构。

2.根据权利要求1所述的RNAi植物表达载体，其特征在于，所述发卡结构表达盒的启动子为水稻或玉米的Ubi启动子、Rubisco小亚基启动子、Cab启动子、CAMV 35S启动子或Actin启动子中的一种；优选地，启动子为水稻或玉米的Ubi启动子。

3.根据权利要求1所述的RNAi植物表达载体，其特征在于，还包括选择标记表达盒，所述选择标记表达盒含有启动子、标记基因和终止子，其中所述启动子为水稻或玉米的Ubi启动子、CAMV 35S启动子，或Actin启动子；所述标记基因为可产生颜色变化的酶的基因、荧光标记基因、抗生素标记基因、除草剂筛选标记基因或抗化学试剂标记基因，所述终止子为NOS终止子或Ubi终止子。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的RNAi植物表达载体，其特征在于，具有SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列。

5.含有权利要求1-4任一所述的RNAi植物表达载体的生物材料，所述生物材料为工程菌、细胞、愈伤组织、植株、种子。

6.根据权利要求1-4任一所述的RNAi植物表达载体的构建方法，包括将SEQ ID No.1-3所示的DNA片段用overlapping方法连接到植物双元转化载体上。

7.一种干扰植物HPPD抑制剂敏感型1基因HIS1表达的方法，其特征在于，使用权利要求1-4任一所述的RNAi植物表达载体转化植物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括：

(1)构建RNAi植物表达载体：将SEQ ID No.1-3所示的DNA片段用overlapping方法连接到植物双元转化载体pTCK303的SacⅠ和BamHⅠ位点间，得到RNAi植物表达载体pTCK303-HIS1i-3；

(2)转化：将pTCK303-HIS1i-3导入农杆菌EHA105菌株，并转化愈伤组织，将转化后的愈伤组织进行诱导分化获得除草剂显性敏感植物。

9.权利要求1-4中任一所述的RNAi植物表达载体在干扰植物HIS1基因表达、制备三酮类除草剂显性敏感植物中的应用。

10.权利要求1-4任一所述的RNAi植物表达载体在培育转基因新品种、杂交水稻制种或防止转基因逃逸中的应用。