[发明专利]一种间皮素嵌合抗原受体外泌体、及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向间皮素嵌合抗原受体免疫细胞的外泌体及其制备方法和应用，属于肿瘤免疫技术领域。通过将免疫细胞以特异性的间皮素抗原活化后，产生的外泌体进行进一步的分析、分离、纯化、富集，最终得到携带CAR的免疫细胞外泌体。本发明的外泌体能用于多种癌症的治疗，如乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等，且这种外泌体具有克服CAR细胞治疗的免疫炎症风暴等不良反应，增强了CAR的组织浸透能力，还具有保存和运输方便的优势，为相关疾病的治疗提供了新的策略。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫学技术领域，具体涉及一种靶向间皮素的嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)免疫细胞来源的外泌体、该外泌体的制备方法以及该外泌体在制备肿瘤免疫治疗药物中的用途。

背景技术

肿瘤的传统治疗方法以手术治疗、化学治疗和放射性治疗为主，免疫治疗作为新型的治疗手段尤为令人关注。免疫治疗包括免疫检查点抗体治疗、单克隆抗体治疗、肿瘤疫苗和嵌合抗原受体细胞治疗等。嵌合型抗原受体修饰免疫细胞已经从肿瘤免疫的临床前模型快速进入到商品化应用阶段。它是将单克隆抗体技术与细胞信号转导技术结合，通过胞外单链抗体可变区片段识别肿瘤表面特异性抗原，绕过抗原提呈和MHC的限制直接攻击肿瘤细胞。目前，美国 FDA 已批准了Kymriah™ (CTL019)、Yescarta 疗法应用于急性白血病和淋巴瘤的治疗，其靶向治疗分化抗原19（cluster of differentiation 19，CD19）阳性的B 细胞白血病和淋巴瘤总缓解率大于80% (June CH, O'Connor RS, Kawalekar OU,Ghassemi S, Milone MC: CAR T cell immunotherapy for human cancer. Science2018, 359(6382):1361-1365；June CH, Sadelain M: Chimeric Antigen ReceptorTherapy. The New England journal of medicine 2018, 379(1):64-73)，显示出了清除肿瘤细胞的潜力。

间皮素是一种锚定在细胞膜上的糖蛋白，通过激活NF-κB、MAPK和PI3K等信号通路调控肿瘤的生长和转移。研究表明，间皮素在多种肿瘤组织中异常表达，包括乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等(Morello A, Sadelain M, Adusumilli PS: Mesothelin-Targeted CARs:Driving T Cells to Solid Tumors. Cancer discovery 2016, 6(2):133-146；Rafiq S,Yeku OO, Jackson HJ, Purdon TJ, van Leeuwen DG, Drakes DJ, Song M, Miele MM,Li Z, Wang P et al: Targeted delivery of a PD-1-blocking scFv by CAR-T cellsenhances anti-tumor efficacy in vivo. Nature biotechnology 2018, 36(9):847-856；Sackstein R, Schatton T, Barthel SR: T-lymphocyte homing: anunderappreciated yet critical hurdle for successful cancer immunotherapy.Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology 2017,97(6):669-697)，且与不良预后相关。因此，间皮素是一种非常有希望的治疗靶点。