[发明专利]一种定量检测弓形虫的引物组及试剂盒和应用

说明书

本发明适用于生物技术领域，提供了一种定量检测弓形虫的引物组及试剂盒和应用，该引物组包括正向扩增引物和反向扩增引物；所述正向扩增引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1；所述反向扩增引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2。本发明提供的定量检测弓形虫的引物组，是选取了针对性的弓形虫基因片段进行设计优化的，其设计严谨，操作简单快速，灵敏性高，特异性强，可应用于人感染弓形虫的血液或脑脊液样本中病原核酸检测问题，其结果判定准确客观。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种定量检测弓形虫的引物组及试剂盒和应用。

背景技术

弓形虫(Toxoplasma Gondii)是细胞内寄生虫，也叫三尸虫。寄生于细胞内，随血液流动，到达全身各部位，破坏大脑、心脏、眼底，致使人的免疫力下降，患各种疾病。它是专性细胞内寄生虫，球虫亚纲，真球虫目，等孢子球虫科、弓形体属。生活周期需要两个宿主，中间宿主包括爬虫类、鱼类、昆虫类、鸟类、哺乳类等动物和人，终宿主则有猫和猫科动物。研究发现大多数人都是弓形虫带虫者，形成带虫免疫，被感染后很难出现初次感染的症状。但在HIV患者中，由于机体免疫力下降，弓形虫可能爆发引发弓形虫脑炎，严重危害患者健康。

目前，弓形虫病常用的检测方法有病理组织检测，病原学检测和血清抗体检测。但由于病理组织检测容易造成患者的实质性损伤，难于实施；病原学检测培养时间长，染色检出率低；免疫低下患者血清中抗体水平普遍低下，易造成抗体检测的不准确等问题，使得目前对于临床患者的血液和脑脊液等样本的弓形虫病原检测十分困难。

荧光定量PCR检测技术具有快速。灵敏。特异等优点，目前，已经有很多采用PCR方法检测弓形虫病原的报道。然而，研究表明，临床标本如血清、全血、组织和脑脊液等样本中含有大量的未知成分，会造成PCR反应的抑制，核酸抽提过程中试剂的残留也会抑制PCR扩增，从而导致假阴性结果或定量值偏低。另一方面，核酸提取过程中的丢失，也会造成假阴性结果。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种定量检测弓形虫的引物组，旨在解决背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种定量检测弓形虫的引物组，其包括正向扩增引物和反向扩增引物；所述正向扩增引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所述反向扩增引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

本发明实施例的另一目的在于提供一种定量检测弓形虫的试剂盒，包括PCR反应液以及上述的引物组。

作为本发明实施例的一种优选方案，所述正向扩增引物的浓度为5～15μmol/L。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述反向扩增引物的浓度为5～15μmol/L。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述PCR反应液包括dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)、荧光染料和Taq聚合酶。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述试剂盒还包括阳性对照物；所述阳性对照物为弓形虫L358基因的一段特异性片段克隆得到的质粒。

作为本发明实施例的另一种优选方案，弓形虫L358基因的一段特异性片段的序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的引物组在制备用定量检测弓形虫的试剂盒中的应用。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的引物组在制备用于荧光定量PCR检测弓形虫的试剂盒中的应用。

本发明实施例提供的一种定量检测弓形虫的引物组，是选取了针对性的弓形虫基因片段进行设计优化的，其设计严谨，操作简单快速，灵敏性高，特异性强，可应用于人感染弓形虫的血液或脑脊液样本中病原核酸检测问题，其结果判定准确客观，完成一次样本检测实际时间控制在2小时，同时也保证了约90％准确性。

附图说明