[发明专利]线粒体功能干预材料在制备改善线粒体功能的保健品或药品中的应用及其筛选方法

权利要求书

1.线粒体功能干预材料在制备改善线粒体功能的保健品或药品中的应用，其特征在于，所述线粒体功能干预材料为NMN、海参肽、西兰花种子水提物、枸杞提取物、槲皮素、橘皮苷或积雪草提取物中一种或几种的混合，优选为NMN或海参肽。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述改善线粒体功能是改善酰基肉碱的累积。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述改善线粒体功能是改善基础耗氧量、ATP 生成或最大耗氧量。

4.一种线粒体功能干预材料的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用棕榈酸构建线粒体损伤模型；

（2）通过 LC-MS/MS法测定酰基肉碱；

（3）运用Seahorse细胞外通量分析仪检测呼吸功能；

（4）定量PCR检测线粒体DNA含量；

（5）实时定量PCR检测主要与线粒体相关基因的mRNA水平的表达；

（6）采用Western blot法检测骨骼肌中线粒体相关基因与氧化磷酸化复合体蛋白质；

（7）采用试剂盒检测MDA含量及NAD+/NADH含量；

（8）采用透射电镜观察细胞线粒体的超微结构并进行形态学分析。

5.根据权利要求4所述的一种线粒体功能干预材料的筛选方法，其特征在于，所述步骤（1）采用棕榈酸构建线粒体损伤模型具体包括如下步骤：

a、 细胞培养

选用C2C12成肌细胞，放入生长培养基中进行培养；

b、细胞传代

待细胞融合率达到80-85%时吸出生长培养基，用PBS冲洗细胞，加入胰酶消化细胞，当

50~70%的细胞变亮变圆时，吸弃胰酶，加入生长培养基终止胰酶消化，脱落已消化的细胞，形成细胞悬液，离心，吸弃上清液，加入生长培养基，按特定的传代比例传至加有生长培养基的培养皿中进行培养；

c、细胞分化

待细胞生长融合率达到75-80%时吸出生长培养基，加入分化培养基进行分化；

d、原料处理

将分化好的C2C12成肌细胞中的分化培养基吸干，并用PBS润洗，然后加入棕榈酸溶液以及原料，将加好原料的细胞置于细胞培养箱中培养，然后吸取细胞培养液存放于-80℃，备用。

6.根据权利要求5所述的一种线粒体功能干预材料的筛选方法，其特征在于，所述生长培养基含有10%FBS和1% P/S；所述分化培养基含有2%HS和1% P/S。

7.根据权利要求5所述的一种线粒体功能干预材料的筛选方法，其特征在于，所述细胞培养的条件为37℃，5%CO₂。

8.根据权利要求5所述的一种线粒体功能干预材料的筛选方法，其特征在于，所述棕榈酸溶液的配置方法为：

称取棕榈酸溶解于无水乙醇中，得到棕榈酸乙醇溶液；称取BSA溶解于PBS中，得到PBS溶液；将棕榈酸乙醇溶液加到PBS溶液中，配制成终浓度为5 mM的棕榈酸溶液。