[发明专利]用于筛选抗应激胁迫肉羊的血清代谢标志物及其应用

权利要求书

1.一种血清代谢标志物在筛选抗应激胁迫肉羊中的应用，所述抗应激胁迫指的是抗热应激胁迫，其特征在于，通过血清代谢标志物在肉羊血清样本中的浓度判断肉羊的抗热应激性，浓度越低，该肉羊具有抗应激胁迫的能力越大，反之越小；所述血清代谢标志物为吲哚-3-乙酸甲酯，采用超高效液相色谱-质谱联用分析方法检测血清样本中的吲哚-3-乙酸甲酯浓度。

2.一种筛选抗应激胁迫肉羊的方法，所述抗应激胁迫指的是抗热应激胁迫，其特征在于，步骤包括：

(1)以已知抗应激胁迫肉羊或非抗应激胁迫肉羊血液为标准供试品，以待测肉羊血液作为检测样品，经离心获取血清样本；

(2)采用超高效液相色谱-质谱联用分析方法检测血清样本中的吲哚-3-乙酸甲酯浓度；

(3)计算标准供试品吲哚-3-乙酸甲酯浓度平均值，作为参考水平，若检测样品相比较参考水平低，则检测样品比标准供试品具有更高的抗应激胁迫能力，反之具有更低的抗应激胁迫能力。

3.根据权利要求2所述的一种筛选抗应激胁迫肉羊的方法，其特征在于，超高效液相色谱-质谱联用分析方法的步骤包括：

步骤一：血清代谢物的提取

在血清样本中加入3倍体积提取液和内标，混匀后-20℃静置2h，4℃下4000转离心20min，取上清，获得血清代谢物；

步骤二：吲哚-3-乙酸甲酯标准品的制备

取吲哚-3-乙酸甲酯标准品溶解配置10nmol/L的标品储备液，取上述储备液配置混合标准液，梯度稀释得到校准溶液；

步骤三：样品质谱分析

用超高效液相色谱-质谱联用分析方法检测血清代谢物和校准溶液；

液相色谱条件：采用Waters 2D UPLC串联Q Exactive高分辨质谱仪来进行代谢物的分离和检测，所使用的色谱柱为BEH C18色谱柱，正离子模式流动相为含0.1％体积比甲酸的水溶液作为A液和含0.1％体积比甲酸的100％甲醇作为B液，负离子模式流动相为含10mM甲酸氨的水溶液作为A液和含10mM甲酸氨的95％甲醇作为B液，按体积百分比计，采用以下梯度进行洗脱：0～1min，2％B液；1～9min，2％～98％B液；9～12min，98％B液；12～12.1min,98％B液～2％B液；12.1～15min，2％B液，流速为0.35mL/min，柱温45℃，进样量为5μL；

质谱条件：利用Q Exactive质谱仪进行一级、二级质谱数据采集，质谱扫描质核比范围为70～1050，一级分辨率为70,000，AGC为3e6，最大注入时间为100ms；按照母离子强度，选择Top3进行碎裂，采集二级信息，二级分辨率为17,500，AGC为1e5，最大注入时间为50ms，碎裂能量设置为：20，40，60eV，离子源参数设置：鞘气流速为40，辅助气流速为10，喷雾电压正离子模式为3.80，负离子模式为3.20，离子传输管温度为320℃，辅助气加热温度为350℃；

步骤四：根据校准溶液的超高效液相色谱串联质谱检测结果绘制标准曲线图，根据标准曲线图计算得到待测样品中吲哚-3-乙酸甲酯含量数据。

4.根据权利要求3所述的一种筛选抗应激胁迫肉羊的方法，其特征在于，所述提取液为由体积比为2:1的甲醇:CAN组成。

5.根据权利要求3所述的一种筛选抗应激胁迫肉羊的方法，其特征在于，所述内标为吲哚-3-乙酸甲酯。