[发明专利]一种γδT细胞的制备和扩增方法以及应用

权利要求书

1.一种体外扩增γδT细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括：

获取或者分离γδT细胞，所述γδT细胞使用磁珠分离；和/或

在含有唑来膦酸、人重组白细胞介素2和人重组白细胞介素7的培养介质中扩增所述的γδT细胞，其中活扩增存在唑来膦酸，浓度为0.5-2.0μM。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的IL-2的浓度为5ng/ml-10ng/ml。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，IL-7浓度为0.5ng/ml-5ng/ml。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当细胞密度达到0.5-2.0x10⁶个/mL时，1：1-1：4传代。

5.权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括：

(1)使用嵌合型抗原受体的表达载体转染293T细胞获得慢病毒载体；

(2)使用步骤(1)获得的慢病毒载体转导γδT淋巴细胞；

所述的嵌合型抗原受体包括：靶向特定适应症抗原的单链抗体ScFv、IgG4铰链区、CD8跨膜区、4-1BB；

所述的ScFv、IgG4铰链区、CD8跨膜区、4-1BB的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7所示；或者

所述的ScFv、IgG4铰链区、CD8跨膜区、4-1BB的核酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8所示。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)包括：

在γδT细胞的培养环境中加入重组有所述的嵌合型抗原受体表达载体的慢病毒；

慢病毒感染24小时后换液。

7.一种γδT细胞，其特征在于，所述的γδT细胞使用权利要求1所述的方法制备。

8.如权利要求7所述的γδT细胞，其特征在于，所述的γδT细胞使用权利要求5所述的嵌合型抗原受体进行基因修饰。

9.权利要求7或者8所述的γδT细胞的应用，其特征在于，所述基因修饰的γδT淋巴细胞在制备抗肿瘤或者抗艾滋病的活细胞药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，其中所述的肿瘤选自肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、直结肠癌、白血病或者卵巢癌。