[发明专利]一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，包括：A液，所述A液为酶液Mix，包括Taq‑WT酶液、UDG酶以及RNA inhibitor；B液，所述B液即2X One Step Buffer包括诺如病毒GI和GII基因型特异性引物和特异性检测探针与10X Taq buffer以及d(U)NTP。通过使用优化的PCR扩增buffer，使得Taq酶具有反转录酶活性与DNA聚合酶活性，由同一个酶完成诺如病毒核酸实时荧光定量PCR检测，其灵敏度与特异性与传统的Real‑time RT‑PCR法相当，但检测时间缩短三分之一，适用于即时快速诊断，降低原料成本和时间成本。

技术领域

本发明涉及病原体核酸检测领域，尤其涉及一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒及检测方法。

背景技术

诺如病毒，是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus，NV)属的一种病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻爆发中，60％-90％是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15％左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。因此对诺如病毒的检测应该被重视。

诺如病毒被分为6个基因群(Genogroup，GI-GVI)，GI和GII是引起人类急性胃肠炎的两个主要基因群，GIV也可感染人，但很少被检出。GIII、GV和GVI分别感染牛、鼠和狗。诺如病毒主要通过粪口途径感染，感染后人和动物能够分泌大量的诺如病毒颗粒。因诺如病毒具有较强的离体存活力和感染性，小剂量诺如病毒即可感染(100个病毒颗粒)，人群对其普遍易感。人体被诺如病毒感染后的临床症状主要是呕吐和腹泻，与其他病原造成的胃肠炎症状也难以区别。

目前，临床上较为常见的检测方法为：1.核酸检测和基因型鉴定：现有的荧光定量PCR均需要先将RNA反转录为cDNA，然后再以cDNA为模板进行荧光定量PCR，因此传统的诺如病毒基因检测需要逆转录酶和Taq DNA聚合酶，随着体外诊断原料价格的上涨，试剂盒添加原料越多，成本也会越高，并且检测时间较长；2.抗原检测：由于诺如病毒抗原高度变异，开发广泛反应的ELISA方法存在较大挑战。

Taq DNA聚合酶是最早发现的热稳定DNA聚合酶之一，通常作为PCR所依赖DNA聚合酶被大家所归类。但是，Taq DNA聚合酶与MMLV逆转录酶属于同一DNA聚合酶超家族，已有研究表明Taq DNA聚合酶具有逆转录酶活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，旨在降低诺如病毒检测的成本，缩短检测时间。

为实现以上目的，本发明提供一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，包括：

A液，所述A液为酶液Mix，包括Taq-WT酶液、UDG酶以及RNA inhibitor；

B液，所述B液即2X One Step Buffer包括诺如病毒GI和GII基因型特异性引物和特异性检测探针与10X Taq buffer以及d(U)NTP。

可选地，所述诺如病毒GI基因型特异性引物和特异性检测探针分别为：

GI-primer-F：5'-ATGTTGGTGACCAACAAGCTGTATCATGGTCTGCTAATG-3'(SEQ IDNO.1)；

GI-primer-R：5'-GCGAGTGGACCCCAATAGTTTTACCTTGCC-3'(SEQ ID NO.2)；

GI-Probe：