[发明专利]一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，其特征在于，包括：

A液，所述A液为酶液Mix，包括Taq酶、UDG酶以及RNAinhibitor；

B液，所述B液即2X One Step Buffer包括诺如病毒GI和GII基因型特异性引物和特异性检测探针与10XTaq buffer以及d(U)NTP。

2.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，其特征在于，所述诺如病毒GI基因型特异性引物和特异性检测探针分别为：

GI-primer-F：5'-ATGTTGGTGACCAACAAGCTGTATCATGGTCTGCTAATG-3'(SEQ ID NO.1)；

GI-primer-R：5'-GCGAGTGGACCCCAATAGTTTTACCTTGCC-3'(SEQ ID NO.2)；

GI-Probe：

5'-[FAM-dT]TGGAGTGAACATTGGCGTTAGTGATCTGACCACTGTCCGTGGACCA[BHQ1-dT]-3'(SEQID NO.3)；

所述诺如病毒GII基因型特异性引物和特异性检测探针分别为：

GII-primer-F：5'-GTGACGCCAACCCATCTGATGGGTCCGCAGCCAACCT-3'(SEQ ID NO.4)；

GII-primer-R：5'-GCACTTCAAAACCACCTGCATAACCGTTGT-3'(SEQ ID NO.5)；

GII-Probe：

5'-[ROX-dT]GGTCAACAATGAGGTTATGGCTCTGGAGCCCGTTGTTGGTGCCGCCA[BHQ2-dT]-3'(SEQ ID NO.6)。

3.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒，其特征在于，所述10X Taq Buffer包括：

200mM的Tris-HCL，20mM的(NH4)₂SO4，300mM的KCl，40mM的MgSO4，1％的Triton X-100，PH为8.0。

4.一种利用权利要求1至3任一项所述的试剂盒检测诺如病毒GI和GII基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的RNA；

(2)配制反应体系：反应体系为30μl，配置时依次向反应管中加入15μlB液，3.5μlNucletide-free wate，1.5μlA液，震荡混匀、离心备用；

(3)向反应管中加入RNA样本10μl，置于混匀器上充分混匀后离心；

(4)反应过程：将反应管置于实时荧光定量PCR仪内，50℃恒温孵育15min，95℃15s，55℃30s为1个循环采集1次荧光信号，共40个循环，整个反应过程共60min。