[发明专利]产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺

说明书

本发明涉及疫苗生产技术领域，具体涉及一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，包括如下步骤：将产气荚膜梭菌培养获得的上清液使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15MPa、回流压力0～0.05MPa，浓缩倍数分别为5～10倍。值得注意的是，浓缩前，需先测定产气荚膜梭菌培养的毒素的含量，当毒素的含量≥400MLD/ml时，方可进行浓缩。本发明通过对产气荚膜梭菌毒素抗原的浓缩处理，使得所得的抗原可以达到疫苗生产的需要，同时可以降低疫苗的免疫剂量，便于临床应用，并减少注射母猪的应激反应。

技术领域

本发明涉及疫苗生产技术领域，具体涉及一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺。

背景技术

为达到配苗要求，C型产气荚膜梭菌毒素抗原需达到3400MLD/ml，因此需进行浓缩处理。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，包括如下步骤：

将产气荚膜梭菌培养获得的上清液使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15MPa、回流压力0～0.05MPa，浓缩倍数分别为5～10倍。

值得注意的是，浓缩前，需先测定产气荚膜梭菌培养的毒素的含量，当毒素的含量≥400MLD/ml时，方可进行浓缩。

进一步地，在保证配苗要求的前提下，可适当降低毒素的浓缩倍数，提高浓缩回收率，浓缩倍数优选为5倍。

本发明具有以下有益效果：通过对产气荚膜梭菌毒素抗原的浓缩处理，使得所得的抗原可以达到疫苗生产的需要，同时可以降低疫苗的免疫剂量，便于临床应用，并减少注射母猪的应激反应。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

试验例

1材料

1.1菌种C型产气荚膜梭菌C59-2 F10代基础种子，由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所鉴定、保管和供应。

1.2主要培养基及原材料 大豆蛋白胨购自北京双旋微生物培养基制品厂，货号02-19；水解酪蛋白购自sigma，货号N4517-1KG；酵母浸膏购自北京双旋微生物培养基制品厂，货号02-22；葡萄糖购自国药集团化学试剂有限公司，货号10010518；氨水购自武汉市洪山中南化工试剂有限公司，货号2672。

梭菌液体培养基准确称取大豆蛋白胨15g、水解酪蛋白15g、酵母浸膏5g、葡萄糖5g，溶于950ml纯化水，用2mol/LNaOH调pH值至8.0～8.5，加纯化水定容至1000ml，116℃高压灭菌30分钟，冷却后备用。

1.3试验动物16～20g昆明小鼠，购自武汉生物制品研究所。

2方法

2.1菌液的培养

按“产气荚膜梭菌培养工艺的研究”最优生产工艺进行100L细菌发酵罐菌液的培养，共培养4次。具体的：

产气荚膜梭菌C59-2在35～37℃培养条件，1％～5％接种，培养过程中根据培养菌液pH值的变化，补加氨水，使培养液的pH值维持在7.0～7.4，培养6～10小时收获。

2.2毒素含量的测定菌液培养完成后，取样，离心取上清，测定毒素的含量(MLD/ml)。