[发明专利]一种米杨噎苷A和B单体的分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种米杨噎苷A和B单体的分离纯化方法，所述方法以米杨噎叶为原料，经特定浓度的乙醇提取，大孔吸附树脂吸附，然后经过硅胶色谱柱层析，最后以高效液相制备C₁₈硅胶色谱柱层析纯化，得到两个新的单体化合物。这种方法能有效除去米杨噎中的大量杂质，一次性可获取两个米杨噎苷，从而可为米杨噎苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

技术领域

本发明涉及中药活性成分的分离提纯技术领域，尤其涉及一种米杨噎苷A和B单体的分离纯化方法。

背景技术

米杨噎(Streblus tonkinensis)属于桑科(Moraceae)鹊肾树属(Strebluslour.)属植物。鹊肾树属(Streblus lour.)属于桑科(Moraceae)植物。米杨噎常作为民间药用植物用于治疗疾病。经文献调研，到目前为止对米杨噎的化学成分及其生物活性的研究未见报道。基于米杨噎作为民间常用药用植物，为了更好的深入研究其中的成分，开发和利用该植物，寻找一种更好的提取率高、成本低和易于工业化生产的米杨噎苷A和B分离纯化工艺，能为米杨噎的特征生物活性研究奠定基础，为构效关系的研究提供前提。

发明内容

针对目前还没有对米杨噎苷单体的分离纯化的问题，本发明提供一种米杨噎苷A和B单体的分离纯化方法。这种方法能有效除去米杨噎中的大量杂质，一次性可获取两个米杨噎苷，从而可为米杨噎苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

实现本发明目的的技术方案是：

一种米杨噎苷A和B单体的分离纯化方法，包括如下步骤：

1)将米杨噎叶用10-15个质量比的65-75％乙醇水溶液提取，回收提取液的乙醇后，余下的水部分用10倍蒸馏水稀释，得到米杨噎叶粗提物水溶液；

2)将步骤1)得到的粗提物水溶液进行D101型大孔吸附树脂柱层析，充分吸附后，用4-6个柱体积蒸馏水冲洗，去除未被吸附的杂质，再依次用各4-6个柱体积的20％-35％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后以4-6体积的38-45％乙醇水溶液洗脱，浓缩洗脱液，得到富含米杨噎苷A和B的洗脱部分；

3)用甲醇溶解步骤2)38％-45％乙醇水溶液洗脱部分样品，然后进行硅胶色谱柱层析，依次各用4-6个柱体积的3％-10％的二氯甲烷与体积比为97％-90％的甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱，弃去3％-5％的二氯甲烷与97％-95％的甲醇混合液洗脱液，收集10％的二氯甲烷与90％的甲醇混合液洗脱物；

4)将步骤3)中收集的10％的二氯甲烷与90％的甲醇混合液洗脱物进行高效液相色谱C₁₈柱层析，获得米杨噎苷A和B，它们都是新的化合物，其结构式分别如下式所示：

步骤1)中所述的米杨噎叶的提取物由如下方法制得：将米杨噎叶粉碎、加入叶10-15倍质量的浓度为65-75％的乙醇水溶液，加热回流提取2-3次，减压浓缩、干燥，得米杨噎叶的提取物，这种提取方法可以将米杨噎叶中的大量杂质去除，确保提取物中主要含有苷、黄酮等成分。

步骤2)中所述的大孔树脂为聚苯乙烯树脂型大孔树脂。

步骤2)中所述大孔树脂的型号为D101，优选的大孔树脂吸附量大，洗脱容易，吸附动力学性能良好，对糖类、蛋白、无机酸、盐、碱、小分子亲水性有机物均不吸附，因而可将一般苷类物质与这些物质分离，在较短的时间内取得较好的分离效果。

步骤3)中所述硅胶色谱柱为正相硅胶色谱柱。

步骤3)中所述的纯化过程为：将步骤2)中38％-45％的乙醇水溶液洗脱、富含米杨噎苷A和B的样品用少量甲醇溶解，然后进行硅胶柱层析，依次用4-6个柱体积的3％-10％的二氯甲烷与97％-90％的甲醇混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱。