[发明专利]一种利用苎麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法

说明书

本发明公开了一种利用BnXTH2基因提高植物抗寒能力的方法，所述方法具体为将BnXTH2基因在辣椒中异源表达。实验证明，通过将BnXTH2基因在辣椒体内异源表达可明显提高辣椒抗寒能力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用苎麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法。

背景技术

辣椒(Capsicum anmuum L.)是一种重要的喜温性蔬菜,在北方保护地种植面积较大,但由于冬季温度低,光照弱,影响了北方地区辣椒的生产。苗期越冬易受突然寒流低温(0℃以下)霜冻或早春阴雨低温(0℃以上)的冷害,严重影响辣椒的生长、早期产量和商品性。急需一种增强辣椒抗寒冬的一种技术。

近期的研究发现XTH5/7过表达(oxXTH5、ox XTH7)转基因植物在低温处理下植株存活率实验发现，过表达XTH基因能够促进辣椒细胞壁中半纤维素的积累从而增强植株抗冻性。番茄XTH3基因也发现与植物抗寒性相关。

利用BnXTH2基因增强辣椒抗寒能力，可以有效解决辣椒抗寒的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种利用苎麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法，经过实验表明，利用苎麻BnXTH2基因可以有效提高辣椒的抗寒能力。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用苎麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法，所述方法具体为将苎麻BnXTH2基因在辣椒中过表达。

进一步地，所述方法包括如下步骤：

S1、BnXTH2基因过表达载体的构建；

1.1)提取整株的总RNA并反转录为cDNA；

1.2)以步骤1.1)得到的cDNA为模板，采用引物BnXTH2-F和BnXTH2-R进行PCR扩增，得到带酶切位点的BnXTH2的开放阅读框；

BnXTH2-F:CGGGATCCATGAGATCATCATCAAGTAGT；

BnXTH2-R:CGAGCTCCTAGTAGCCAGCGAGGCACT；

1.3)将表达载体pBI 121和BnXTH2片段进行酶切，酶切体系如下：

37℃反应过夜，凝胶电泳胶回收目的PCR片段；

1.4)采用T4连接酶将步骤1.3)中得到的PCR片段与载体片段连接，具体体系如下：

16℃反应过夜，进行大肠杆菌转化；

1.5)质粒提取：

将步骤1.4)中成功转化大肠杆菌采用质粒提取试剂盒进行质粒提取；

1.6)转化EHA105：

利用步骤1.5)提取得到的质粒进行农杆菌EHA105转化；

S2、对辣椒进行农杆菌侵染转化及组织培养：

2.1)接种农杆菌至含Rif+Kan的YEP液体培养基中，摇菌至OD＝1.5；

2.2)4℃离心后加入含0.3％AS的1/2MS液体培养基重悬，使其OD＝0.5；

2.3)将辣椒带子叶胚轴下胚轴进行农杆菌浸染后共培养2d后，转移至MS+6-BA3mg/L+NAA 0.8mg/L+Tim 300mg/L+Kan100mg/L愈伤培养基上，每14d更换培养基直至长出丛生芽；