[发明专利]一种沉积物石蜡切片的制作方法

权利要求书

1.一种沉积物石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.取样：用吸管插取沉积物柱状样本，然后用液氮速冻；

b.固定：切开并移除吸管，加入体积分数2.5％戊二醛水溶液固定沉积物柱状样本，在黑暗中固定过夜；

c.浸洗：用pH7.2的0.1M PBS溶液浸洗固定后的样本三次；

d.脱水：用梯度乙醇脱水处理；

e.透明处理：先用体积比为1:1的二甲苯/乙醇处理一次，再用二甲苯处理两次；

f.浸蜡包埋：用65℃的石蜡浸蜡处理三次，然后置于包埋盒中冰上包埋；

g.二次包埋：将包埋后的沉积物块修整至切面小于8mm×8mm，随后重复一次步骤f的操作进行二次包埋；

h.修块及切片：将切面修整至小于1cm×1cm后，使用手动轮转式病理切片机连续切片，并在40℃水浴中进行展片，再用多聚赖氨酸包埋的细胞爬片进行贴片；

i.烤片：将切片竖直置于65℃烘箱中烤片；

j.贴膜：将切片在体积分数0.3％的聚乙烯醇缩甲醛水溶液中蘸一下，然后用离子加湿器吹切片使其在表面形成一层微孔滤膜；

k.脱蜡：用二甲苯脱蜡两次；

l.置换：用乙醇置换二甲苯两次，然后用叔丁醇置换二甲苯一次；

m.用冷冻干燥机冻干样本，然后进行扫描电镜观察。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤c的浸洗，每次10min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤d的用梯度乙醇脱水处理，是依次用体积分数70％乙醇水溶液、体积分数85％乙醇水溶液、体积分数95％乙醇水溶液、乙醇、乙醇进行脱水处理，每次脱水处理30min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤e，具体为：先用体积比为1:1的二甲苯/乙醇处理30min，再用二甲苯处理两次，每次30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤f，具体为：用65℃的石蜡浸蜡处理三次，每次1h；然后置于包埋盒中冰上包埋3h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤h中切片厚度为25μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤k，具体为：用二甲苯脱蜡两次，每次24h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤l，具体为：用乙醇置换二甲苯两次，每次4h；然后用叔丁醇置换二甲苯2h。