[发明专利]宫颈癌基因甲基化检测引物探针组合及其试剂盒与应用

权利要求书

1.宫颈癌基因甲基化检测位点，其特征在于，所述的基因甲基化检测位点包括SOX1、AJAP1、ZNF671中的一种或多种。

2.宫颈癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，包括以下1)-3)所示的核酸序列组合中的一种或或多种：

1)SOX1甲基化检测的PCR引物及探针，包括引物探针组合1、引物探针组合2、引物探针组合3中的一种或多种，其中所述引物探针组合1包括如SEQ ID NO.1所示的上游引物、如SEQ ID NO.2所示的下游引物、如SEQ ID NO.3所示的荧光探针，所述引物探针组合2包括如SEQ ID NO.4所示的上游引物、如SEQ ID NO.5所示的下游引物、如SEQ ID NO.6所示的荧光探针，所述引物探针组合3包括如SEQ ID NO.7所示的上游引物、如SEQ ID NO.8所示的下游引物、如SEQ ID NO.9所示的荧光探针；

2)AJAP1甲基化检测的PCR引物及探针，包括引物探针组合4、引物探针组合5、引物探针组合6中的一种或多种，其中所述引物探针组合4包括如SEQ ID NO.10所示的上游引物、如SEQ ID NO.11所示的下游引物、如SEQ ID NO.12所示的荧光探针，所述引物探针组合5包括如SEQ ID NO.13所示的上游引物、如SEQ ID NO.14所示的下游引物、如SEQ ID NO.15所示的荧光探针，所述引物探针组合6包括如SEQ ID NO.16所示的上游引物、如SEQ ID NO.17所示的下游引物、如SEQ ID NO.18所示的荧光探针；

3)ZNF671甲基化检测的PCR引物及探针，包括引物探针组合7、引物探针组合8、引物探针组合9中的一种或多种，其中所述引物探针组合7包括如SEQ ID NO.19所示的上游引物、如SEQ ID NO.20所示的下游引物、如SEQ ID NO.21所示的荧光探针，所述引物探针组合8包括如SEQ ID NO.22所示的上游引物、如SEQ ID NO.23所示的下游引物、如SEQ ID NO.24所示的荧光探针，所述引物探针组合9包括如SEQ ID NO.25所示的上游引物、如SEQ ID NO.26所示的下游引物、如SEQ ID NO.27所示的的荧光探针。

3.如权利要求2所述的宫颈癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，还包括括检测内参基因GAPDH的PCR引物及探针，所述引物包括如SEQ ID NO.28所示的上游引物、如SEQ ID NO.29所示的下游引物，所述探针包括如SEQ ID NO.30所示的荧光探针。

4.如权利要求2或权利要求3所述的宫颈癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的5’端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、NED、ROX、TET、JOE、TAMRA、CY3、CY5中的任意一种。

5.如权利要求2或权利要求3所述的宫颈癌基因甲基化检测的PCR引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的3’端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团包括MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3中的任意一种。

6.一种宫颈癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求2或权利要求3所述的PCR引物探针组合，还包括阳性质控品以及阴性质控品。

7.如权利要求6所述的宫颈癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述宫颈癌基因甲基化检测试剂盒反应体系的终浓度组成包括：0.1-1μM PCR引物、0.1-1μM探针。

8.如权利要求6所述的宫颈癌基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的PCR反应条件如下：