[发明专利]一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法

权利要求书

1.一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

步骤1：获取脑部组织；

步骤2：培养所述脑部组织来获取脑部干细胞，具体的说，所述脑部组织进行拟胚体制备、胚层分化得到所述脑部干细胞；

步骤3：对所述脑部干细胞进行诱导，形成原始上皮组织，所述原始上皮组织为神经上皮组织，将所述神经上皮组织进行培养获取神经上皮细胞；

步骤4：将所述神经上皮细胞转移至基质胶混合并进行培养获取脑部类器官；

步骤5：将所述脑部类器官进行扩大培养；

步骤6：将所述脑部类器官进行冻存建库及复苏。

2.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：所述脑部组织为活跃度较高的脑部肿瘤组织，且在低温条件下进行运输。

3.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：在所述拟胚体制备之前，所述脑部组织中加入细胞消化酶后获取脑部细胞于六孔板内，所述所述拟胚体的制备过程具体包括：

首先，所述六孔板内加入Advantage DMEMF-12培养基与所述脑部细胞混合，并置于二氧化碳培养箱中培养，培养后去除所述Advantage DMEMF-12并用缓冲液溶液清洗残留培养基；

其次,在所述六孔板内加入蛋白水解酶并置于所述二氧化碳培养箱中培养，培养后去除所述蛋白水解酶并加入低bFGF-hESC培养基后得到脑部干细胞；

最后，在所述脑部干细胞溶液中加入含ROCK抑制剂的低bFGF-hESC培养基重新培养，将所述脑部干细胞转移至96孔U形底板并置于所述二氧化碳培养箱中培养。

4.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：所述胚层分化的具体过程包括：

首先,更换所述96孔U形底板中的所述含ROCK抑制剂的低bFGF-hESC培养基，并用体视显微镜测量所述脑部干细胞直径，

其次，当所述脑部干细胞的直径大于350μm，将所述96孔U形底板中的所述含ROCK抑制剂的低bFGF-hESC培养基更换为不含ROCK抑制剂的低bFGF-hESC培养基进行培养所述脑部干细胞，直到所述脑部干细胞的直径大于500μm。

5.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：关于步骤3，获取所述神经上皮细胞具体包括：将直径大于500μm的所述脑部干细胞转移至24孔板内，并添加神经诱导培养基进行培养，之后去除所述神经诱导培养基，提取所述神经上皮细胞。

6.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：关于步骤4，获取所述脑部类器官具体过程包括：

首先，选取封口膜，将所述封口膜剪成正方形，按入形成凹槽，所述正方形封口膜置于培养皿中；

其次，将所述神经上皮细胞与所述基质胶混合后置于所述凹槽内进行包埋，并在所述二氧化碳培养箱中进行培养；

最后，在所述培养皿中加入脑类器官分化培养基，并置于所述二氧化碳培养箱中进行培养。

7.根据权利要求1所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：关于步骤5，所述脑部类器官扩大培养具体步骤包括：

首先，将所述培养皿中的所述脑部类器官转移至旋转生物反应器中；

其次，在所述旋转生物反应器中加入所述脑类器官分化培养基；

最后，将所述旋转生物反应器安装于所述二氧化碳培养箱中进行培养。

8.根据权利要求7所述的一种利用多能干细胞生成脑部类器官的方法，其特征在于：所述旋转生物反应器在安装于所述二氧化碳培养箱之前需使用酒精喷洒擦拭后，且所述旋转生物反应器安装于搅拌板上。