[发明专利]一种两面针组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种两面针组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体选取与消毒：选取两面针的幼嫩茎作为外植体进行消毒处理，得到消毒外植体；

(2)培养基的制备：制备改良MS培养基，然后在改良MS培养基的基础上分别制备不定芽诱导培养基、继代增殖培养基和无菌生根培养基；所述改良MS培养基配方为在MS培养基中降低硝酸铵的用量，达到550-825mg/L，其他组分均无变化；

(3)不定芽诱导培养：将消毒外植体的芽接种于不定芽诱导培养基中进行诱导培养，得到两面针不定芽；

(4)继代增殖：将两面针不定芽接入继代增殖培养基中进行继代增殖培养，得到两面针丛苗；

(5)无菌生根：将两面针从苗接入无菌生根培养基中进行生根培养，得到两面针幼苗，然后炼苗、移栽。

2.根据权利要求1所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基配方为在所述改良MS培养基上添加6-BA和IAA；在不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1-3mg/L，IAA的浓度为0.1-0.5mg/L。

3.根据权利要求2所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述用于不定芽诱导的培养基中6-BA的浓度为2mg/L，IAA的浓度为0.5mg/L。

4.根据权利要求2所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养条件是温度为28±2℃，相对湿度为85±10％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；培养时间为4-6周。

5.根据权利要求1或2所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述继代增殖培养培养基配方为在所述改良MS培养基上添加6-BA和IAA；在继代增殖培养基中6-BA的浓度为1-3mg/L，IAA的浓度为0.1-0.2mg/L。

6.根据权利要求5所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述用于继代增殖的培养基中6-BA的浓度为2mg/L，IAA的浓度为0.2mg/L。

7.根据权利要求5所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述继代增殖培养条件是温度为28±2℃，湿度为85±10％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；培养时间为4周。

8.根据权利要求1或7所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述无菌生根培养基配方为在所述改良MS培养基的基础上添加NAA和IBA，在生根培养基中NAA的浓度为0.5-1mg/L，IBA的浓度为0.2-0.5mg/L。

9.根据权利要求8所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述用于无菌生根的培养基中NAA的浓度为1mg/L，IBA的浓度为0.5mg/L。

10.根据权利要求8所述两面针组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述生根培养条件是温度为28±2℃，湿度为85±10％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；培养时间为30-50天。