[发明专利]一种循环神经细胞检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于医学生物技术研究领域，本发明第一方面，公开了含有荧光标记的神经元特异性抗体，荧光标记的白细胞经典标志物抗体和细胞核荧光染料的循环神经细胞检测试剂盒，本发明第二方面，公开了一种用于检测循环神经细胞的密度梯度离心试剂盒及其检测方法，本发明第三方面，公开了一种用于检测循环神经细胞的免疫磁珠试剂盒及其检测方法。与目前常规的检测手段相比，本发明公开的技术方案具有特异性高，检测取样简单，检测成本价格更低，同时可以实现血液样本实时监测的技术效果。

技术领域

本发明属于医学生物技术研究领域，涉及一种循环神经细胞检测试剂盒及检测方法。

背景技术

近年来，我国脑卒中发病年龄年轻化的趋势明显，这将对社会经济发展产生严重影响。已有研究表明，脑卒中与多种疾病有着密切关系，例如糖尿病、高血压和心脏病，甚至与遗传因素有关。由于脑卒中的发病因素的异质性非常高，如何对脑卒中进行方便、快捷、准确的诊断，对于脑卒中的预防、预后监测有着重要意义。目前主要基于临床诊断和神经影像学诊断对缺血性脑卒中进行诊断，这在很大程度上取决于局部可用性，并且在缺血性脑卒中发生的早期阶段很难检测到。

但是目前常用的诊断和影像学诊断技术均存在着缺点。计算机断层扫描技术、非对比计算机断层扫描、计算机体层摄影血管造影和磁共振成像等不能区别急性和慢性缺血性脑卒中，很难检测出慢性出血，包括微出血，评估蛛网膜下腔和脑内出血的能力不足，成像过程中所使用的造影剂具有相应的肾脏毒性，同时检测费用比较贵。基于液体活检的生物标志物，主要是来源于外周血、血浆、血清、脑脊液中的分子层面的生物标志物，主要包括发生脑卒中等中枢神经系统疾病后神经细胞所释放的蛋白等。主要有S100B蛋白、MMP-9蛋白、白介素6、粘附分子等。这些蛋白层面的生物标志物在循环系统中需要经过一定的潜伏期才能被检测到。例如S100B的释放延迟及缺乏对脑卒检测的特异性，所以在临床使用中受到限制。另外检测时间是脑卒中诊断中最关键的因素之一。尽管微阵列可以提供数千种基因的高通量筛选，但需要约11小时才能进行分析。另外，需要特殊的仪器并且有经验的人员来执行分析，这不利于临床上的即时检验。针对于缺血性脑卒中等的中枢神经系统疾病的研究都集中在蛋白质和核糖核酸层面。蛋白质和核糖核酸是在缺血性脑损伤后从神经细胞释放出来并穿过血脑屏障进入外周血的。血脑屏障的损伤和脑水肿形成是急性和慢性脑缺血神经功能障碍发生和发展的重要因素。缺血性脑卒中的明确的生物标志物将显著促进卒中的预测，尤其是早卒中发生的早期阶段，并对神经影像分析提供一定的补充作用。

针对缺血性脑卒中，大多数生物标志物的研究都集中在蛋白质和核糖核酸上，这些蛋白质和核糖核酸是在缺血性脑损伤后从神经细胞释放出来并穿过血脑屏障进入外周血的。血脑屏障是一个动态网络，可调节循环系统与脑实质之间的物质交换，同时还能维持中枢神经系统的体内平衡。血脑屏障的损伤和脑水肿形成是急性和慢性脑缺血神经功能障碍发生和发展的重要因素。缺血性脑卒中的明确的生物标志物将显著促进卒中的预测，尤其是脑卒中发生的早期阶段，并对神经影像分析提供一定的补充作用。因此，急性缺血性脑卒中急需可以准确预测其发生及复发的生物标志物。循环细胞，由相应的器官释放进入到循环系统中，其产生的分子生物标志物(蛋白、微小RNA和游离核酸)可以揭示健康与疾病的关键信息。

但是，目前学者们尚未确定在细胞水平上可以准确描述缺血性脑卒中发生和发展的特定生物标志物，如何通过循环神经细胞的特点生物标志物来揭示健康与疾病的关键信息。因此，本领域技术人员致力于研发一种循环神经细胞检测试剂盒及检测方法。

发明内容

为了检测神经系统中的循环神经细胞，通过检测其产生的分子生物标志物，来寻找和确定循环神经细胞，本申请第一方面公开了一种循环神经细胞检测试剂盒，检测试剂盒包括：CTC富集的CD36抗体，2％FBS的HBSS缓冲液，密度梯度离心液，红细胞裂解液，细胞破膜封闭液，荧光标记的神经元特异性抗体，荧光标记的白细胞经典标志物抗体，细胞核荧光染料，微孔阵列芯片，包含循环神经细胞标志物的标准品和包含阳性对照和阴性对照的质控品。