[发明专利]一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用，属于生物工程技术领域。该试剂盒包括采用猪支原体抗原包被的酶标板和兔抗EF‑Tu血清；所述兔抗EF‑Tu血清是采用重组EF‑Tu蛋白免疫新西兰兔，采血分离血清后所得，所述重组EF‑Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。本发明试剂盒，该方法耗时短、准确性高、能检测灭活疫苗中猪支原体抗原含量。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用。

背景技术

支原体是能够在自然界独立生存的最小原核生物，迄今分离出的支原体达190余种，遍布于世界各地，种类多，影响面广，危害很大。其中猪支原体在兽医学上是一类重要的病原微生物，支原体病一般发病进程缓慢，发病率及死亡率较低，但能给生产造成巨大的经济损失。如由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)引起的猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine，MPS)，广泛发生于世界各地，临床症状主要为咳嗽和气喘，一般患猪死亡率不高，但严重降低饲料转化率，长期生长发育不良，造成巨大的经济损失。其他可危害猪只健康的还有猪鼻支原体(可引起多发性浆膜炎、关节炎等临床症状，导致猪生长性能下降)、猪絮状支原体(可引起支气管发生轻微病变)、猪滑液支原体(可引起10周龄以上小猪关节炎)等。

目前，疫苗接种是预防控制猪支原体感染的关键措施，在疫苗研制过程中，抗原含量是重要的质量控制指标，与疫苗的实际效力密切相关。对于猪支原体抗原含量的测定，通常采用标准的颜色变化单位(CCU)计数法，但这种方法检测的是培养收获时活的支原体的量，因此只适合于活疫苗产品的质量评价，不适合用于灭活疫苗生产及成品疫苗的有效抗原含量检测，同时该方法测定周期长，还会受到检测血清、检测容器、平行数测定、采样时间等影响。

现有技术中缺乏能够用于灭活疫苗的高效、准确检测猪支原体抗原含量的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷，提供一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，以解决支原体传统定量检测方法费时长、准确性低、不能检测灭活疫苗中猪支原体抗原含量的弊端。

本发明的另一目的是提供以非诊断为目的采用所述试剂盒检测猪支原体抗原含量的方法，该方法耗时短、准确性高、能检测灭活疫苗中猪支原体抗原含量。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，包括采用猪支原体抗原包被的酶标板和兔抗EF-Tu血清；所述兔抗EF-Tu血清是采用重组EF-Tu蛋白免疫新西兰兔，采血分离血清后所得，所述重组EF-Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。

在本发明中，所述酶标板采用猪支原体裂解液进行包被。

在本发明中，所述重组EF-Tu蛋白是通过诱导表达携带EF-Tu蛋白编码基因的重组菌所得。

在本发明中，所述酶标板采用猪支原体裂解液进行包被后采用含有明胶的PBS缓冲液封闭。

在本发明中，所述试剂盒还包括猪支原体抗原菌液标准品、PBST溶液和羊抗兔HRP-IgG、显色液和终止液。

在本发明中，PBST溶液是含体积百分浓度为0.05％Tween-20的PBS缓冲液；所述羊抗兔HRP-IgG购自武汉博士德生物公司，产品编号是BA1054。

在本发明中，所述猪支原体包括猪肺炎支原体、猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体。

本发明还提供以非诊断为目的采用所述试剂盒检测的猪支原体抗原含量的方法，包括如下步骤：