[发明专利]一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于包括采用猪支原体抗原包被的酶标板和兔抗EF-Tu血清；所述兔抗EF-Tu血清是采用重组EF-Tu蛋白免疫新西兰兔，采血分离血清后所得，所述重组EF-Tu蛋白的序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于所述酶标板采用猪支原体裂解液进行包被。

3.根据权利要求1或2所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于所述重组EF-Tu蛋白是通过诱导表达携带EF-Tu蛋白编码基因的重组菌所得。

4.根据权利要求3所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于所述酶标板采用猪支原体裂解液进行包被后采用含有明胶的PBS缓冲液封闭。

5.根据权利要求4所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括猪支原体抗原菌液标准品、PBST溶液和羊抗兔HRP-IgG、显色液和终止液。

6.根据权利要求5所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于PBST溶液是含体积百分浓度为0.05％Tween-20的PBS缓冲液；所述羊抗兔HRP-IgG购自武汉博士德生物公司，产品编号是BA1054。

7.根据权利要求6所述通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒，其特征在于所述猪支原体包括猪肺炎支原体、猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体。

8.以非诊断为目的采用权利要求1中所述试剂盒检测的猪支原体抗原含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)在猪支原体抗原包被的酶标板中，设置待检样品孔和空白对照样品孔，在待检样品孔中加入待检样品，在空白对照样品孔中加入PBS缓冲液，然后每孔加入兔抗EF-Tu血清，孵育后PBST溶液洗涤；

(2)每孔加入羊抗兔HRP-IgG，孵育；

(3)PBST溶液洗涤后，加入TMB底物显色液；

(4)加入终止液终止反应，在450nm处读取吸光值；

(5)根据标准曲线计算猪支原体抗原含量。

9.权利要求1所述试剂盒在检测猪支原体培养物或者猪支原体疫苗产品中抗原含量的应用。