[发明专利]一种免疫细胞储存液及其制备与应用方法

权利要求书

1.一种免疫细胞储存液，其特征在于：每1000ml储存液包括以下成份及含量：

蔗糖25-75g；

甘油50-150ml；

白蛋白20-30g；

碳酸氢钠5-10g；

胆固醇0.2-0.4g；

丙二醇5-8％mg；

维生素E0.6-1.1g；

维生素C0.6-0.9mg；

EDTA为0.01-0.4％mg；

磷酸盐缓冲液为65％-95％ml；

亚硒酸钠为0.01％-0.5％mg；

余量为细胞培养基。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞储存液，其特征在于：每1000ml储存液包括以下成份及含量：

蔗糖55g；

甘油100ml；

白蛋白25g；

碳酸氢钠7g；

胆固醇0.3g；

丙二醇6％mg；

维生素E1g；

维生素C0.7mg；

EDTA为0.2％mg；

磷酸盐缓冲液为75％ml；

亚硒酸钠为0.2％mg；

余量为细胞培养基。

3.根据权利要求1所述的免疫细胞储存液，其特征在于：所述细胞培养基为DMEM/F12培养基。

4.一种免疫细胞储存液制备方法，其特征在于，包括以下：

步骤1、按照权利要要求1-3任意一项中的配比配料，混合均匀，2-5℃预冷，得到原液；

步骤2、将原液在2000-3000r/min离心10-20min，然后取上清液，得到免疫细胞存储液。

5.一种免疫细胞储存液使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将细胞用生理盐水洗涤2-3次，均匀涂布于培养皿中，置于37℃，80rpm的摇床中，孵育10min；

步骤2、利用移液器将残留的消化液吸出，并加入权利要求1-3任意一项中的储存液，至浸润状态，置于37℃，70rpm的摇床中，孵育100min，促进细胞贴壁；

步骤3、待细胞贴壁后，再加入少量储存液，置于37℃，CO2浓度含量为5％，湿度为60-80％的环境中进行培养，观察并记录细胞分离生长情况；

步骤4、2～3天更换一次工作培养液培养液。