[发明专利]一种湿地松种苗的组织培养快繁技术

权利要求书

1.一种湿地松种苗的组织培养快繁技术，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、对母株进行预处理，从母株中取材外植体，并对所述外植体进行消毒处理；

步骤二、嫩茎诱导：将所述外植体接种入诱导培养基后放置于培养室进行培养，获得无菌芽体；

步骤三、丛生侧芽增殖：将步骤二所获得的无菌芽体保留生理学上部的茎，转接到增殖培养基进行培养，获得丛生芽；

步骤四、无根芽体复壮培养：将步骤三所获得的丛生芽分成单株无根苗芽，转接入复壮培养基进行培养，使无根苗芽恢复健壮；

步骤五、生根培养：将步骤四所获得的达到生根标准的单株无根苗芽，转接到生根诱导培养基促使发根；

步骤六、驯化培养：将步骤五所获得的长出不定根或根原基萌发的苗芽，转移至温室内接受自然光和温度的驯化；

步骤七、组培苗移栽：洗净步骤六所获得的经过驯化的组培苗的根系，然后种植组培苗；

其中，所述诱导培养基组分为改良MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤0.5-1㎎/L、萘乙酸 0.1㎎/L、蔗糖25g/L，琼脂5 克/升；其中，改良MS培养基的组分为：硝酸钾2.2克/升、硝酸铵1.3克/升、磷酸二氢钾0.17克/升、磷酸二氢钠0.17克/升、七水合硫酸镁0.37克/升、二水合氯化钙0.44克/升、四水合硫酸锰22毫克/升、七水合硫酸锌8.6毫克/升、五水合硫酸铜0.025毫克/升、硼酸6.2毫克/升、钼酸钠0.25毫克/升、六水合氯化钴0.25毫克/升、碘化钾0.83毫克/升、七水合硫酸亚铁22.8毫克/升、乙二胺四乙酸二钠37.3毫克/升、盐酸硫胺素1毫克/升、盐酸吡哆醇0.5毫克/升、烟酸0.5毫克/升、肌醇200毫克/升、甘氨酸2毫克/升、生物素0.1毫克/升、L-半胱氨酸1毫克/升、谷氨酰胺3毫克/升；

所述增殖培养基为以下组分：1/2改良MS培养基、6-苄氨基腺嘌呤0.5 -1.5㎎/L、萘乙酸0.02-0.1㎎/L 、吲哚丁酸0.05-0.1mg/L、激动素0.5-1㎎/L、蔗糖30g/L、琼脂5 克/升，其中，所述增殖培养基pH值5.8-6.0；

所述复壮培养基为以下组分：1/2改良MS培养基、激动素1-2㎎/L、萘乙酸0.1-0.5㎎/L、活性炭1g/L、蔗糖30g/L，琼脂5克/升，其中，所述复壮培养基pH值5.8-6.0；

所述生根诱导培养基为以下组分：1/3MS培养基、萘乙酸 0.01-0.1㎎/L、吲哚丁酸1-5㎎/L、水解酪蛋白0.5-1克/升、核黄素1-3毫克/L、蔗糖30g/L、琼脂5克/升，其中所述生根诱导培养基pH值为5.8-6.0。

2.如权利要求1所述的一种湿地松种苗的组织培养快繁技术，其特征在于，所述步骤一的步骤包括：于2月-4月中旬选取经过平茬处理后萌发的湿地松植株的半木质化嫩茎作为母株；取材前2周对母株采取遮光处理定期喷施广谱杀菌药7天/次，喷施2次后取材；其中，外植体长度2-5厘米长；取材后先流水冲洗1-2小时，后晾至外植体表面没有明显水渍；将针叶剪去仅留2-3毫米长度；用每升添加2-3滴浓度为1摩尔/升的盐酸的75%乙醇溶液震荡消毒45秒，后用无菌水冲洗，晾干，然后用有效氯含量1.5%的漂白水溶液、0.15毫升/升的TWEEN-20漂白水溶液消毒18-25分钟，使消毒剂渗透外植体；用无菌水冲洗3-5次，每次2分钟，后用无菌滤纸将外植体残余水分吸干。

3.如权利要求1所述的一种湿地松种苗的组织培养快繁技术，其特征在于，所述步骤二的步骤包括：外植体接种入所述诱导培养基后放置于培养室培养，先暗培养2天，然后转入光照培养，其中，光照培养时光周期12-16小时/天，光照度1500-3000勒克斯；室内温度控制25±2摄氏度；诱导培养期间定期观察污染和诱导生长情况；25-30天后将外植体转入所述增殖培养基扩繁。

4.如权利要求1所述的一种湿地松种苗的组织培养快繁技术，其特征在于：将所述无菌芽体切掉基部1-2毫米，然后转接到所述增殖培养基；和

培养条件包括：光周期12-16小时/天，光照度1500-3000勒克斯，室内温度控制25±2℃；和

培养30-35天后，获得丛生芽丛，将丛生芽切割为单独芽体或丛芽团继续转接到同样的增殖培养基中多次继代培养，转接周期30-35天一代。