[发明专利]一种PRRSV的IPMA抗体检测方法在审
| 申请号： | 202011240726.4 | 申请日： | 2020-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN112362868A | 公开（公告）日： | 2021-02-12 |
| 发明（设计）人： | 王选年;李鹏;冯春花;王利平;高小静;李红;孙国鹏;岳锋;朱艳平;郭东光;张艳芳;齐永华;潘鹏涛 | 申请（专利权）人： | 新乡学院 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王敏 |
| 地址： | 453000 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 prrsv ipma 抗体 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种PRRSV的IPMA抗体检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)接毒：细胞瓶内细胞长至50-70％时，将100个TCID50的PRRSV病毒液接种到Marc145细胞上，加入含2％胎牛血清的DMEM培养基进行培养；
(2)铺板：细胞长满后将其铺到96孔板内，每孔接种100μL，置于CO2培养箱中继续培养24h，观察细胞生长情况，待细胞长满后，取出96孔板；同时设立不接毒正常细胞对照孔；
(3)固定：把取出的96孔板用PBS冲洗2-3次，然后用预冷的无水乙醇于-20℃固定30min，细胞反应板制备成功；
(4)加一抗：把细胞反应板用PBS洗过2-3次，加入100μL用0.01M PBS 1:400稀释的PRRSV标准阳性血清，置于37℃中作用1h；
(5)加二抗：加入100μL用0.01M PBS(pH7.4)稀释1000倍羊抗猪IgG-HRP二抗，37℃作用1h；
(6)显色：DAB显色5min，终止反应，置光学显微镜下观察显色结果。
2.根据权利要求1所述的一种PRRSV的IPMA抗体检测方法，其特征在于，所述PRRSV病毒液的制备方法如下：将PRRSV的病料组织用PBS冲洗，剪碎后1g组织样品加入1mL PBS，反复冻融三次，制成病料研磨液。
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