[发明专利]检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，包括免疫层析试纸条和样本稀释液。本发明的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以犬胰脂肪酶单克隆抗体定量检测犬胰腺炎，借助免疫分析仪检测荧光信号，通过光电磁信号放大系统使检测灵敏度得到大大的提高，有效排除背景色的干扰，减少了人为因素对结果的误判，操作安全、简单、快速(15min)、灵敏度高。而且本发明针对犬胰腺炎的检测将样本稀释液进行了改进，加入0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐(MAPK)和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵(AESA)，能够提高检测的准确度。

技术领域

本发明涉及免疫层析技术领域，特别是涉及一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。

背景技术

胰腺炎是一种胰腺的炎症疾病，它与不同种类的炎症细胞相关，也可以被定义为胰腺的自消化性炎症。胰腺炎通常开始于消化酶的提前激活。而消化酶的提前激活可以由创伤、药物感染甚至饮食引起。胰腺炎可分为急性胰腺炎和慢性胰腺炎。犬急性胰腺炎在临床上更为常见，程度从轻微到致命都有可能，这令其很难与其他胃肠道疾病区分开来。急性胰腺炎发病急，病程短，所以及时诊治对其格外重要。

目前检测犬胰腺炎的免疫学方法主要有酶联免疫法、金标免疫渗滤法(金标法)、化学发光法、分子诊断法(PCR)等。但是金标免疫渗滤法(金标法)灵敏度不高，重复性和准确性均有欠缺，抗干扰能力不足，检测时间长，致使临床价值受到很大的限制。化学发光法需要大型仪器，而且对实验人员的要求较高，在宠物医院难以普及。

发明内容

基于此，有必要提供一种准确度较高的检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒。

一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，包括免疫层析试纸条和样本稀释液；

所述样本稀释液为含有0.5wt％～2wt％吐温20、0.5wt％～2wt％聚乙烯吡咯烷酮40、0.001M～0.005M乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钾、0.001wt％～0.005wt％防腐剂P300、0.2M～0.5M氯化钠、0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵的缓冲液；

所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫的两端分别与所述样品垫及所述反应膜搭接，所述反应膜远离所述结合垫的一端与所述吸水垫搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述结合垫，所述结合垫上含有分别用荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体和第一质控抗体，所述检测线上包被有犬胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。

在其中一个实施例中，所述样品垫上含有鼠IgG、伊文斯兰、阻断剂R-001、吐温20和BSA。

在其中一个实施例中，所述结合垫上还含有吐温20、BSA和蔗糖。

在其中一个实施例中，所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体，所述第二质控抗体为兔IgG抗体。

在其中一个实施例中，所述荧光微球为荧光胶乳微球。

在其中一个实施例中，所述荧光微球的直径为200mm～500nm，所述荧光微球在300nm～400nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。

本发明还提供了一种上述荧光免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

将所述吐温20、聚乙烯吡咯烷酮40、乙二胺四乙酸二钠、防腐剂P300、氯化钠、月桂基磷酸单酯钾盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵和Tris盐酸缓冲液混合得到所述样本稀释液；

将分别用荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体和第一质控抗体包被在结合垫上；