[发明专利]一种肿瘤组织消化液及其方法在审
| 申请号： | 202011221294.2 | 申请日： | 2020-11-05 |
| 公开（公告）号： | CN112322586A | 公开（公告）日： | 2021-02-05 |
| 发明（设计）人： | 林传勇;吴声鹏 | 申请（专利权）人： | 广州元信生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 深圳科湾知识产权代理事务所(普通合伙) 44585 | 代理人： | 钟斌 |
| 地址： | 510000 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 组织 消化液 及其 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种肿瘤组织消化液，其特征在于，包括有以下成份：
II型胶原酶2mg/ml；
IV型胶原酶2mg/ml；
Dispase 0.2ml/ml；
DNA酶12units/ml；
FBS体积分数10％；
DMEM 0.8ml/ml；
CaCl2 3mmol/L。
2.一种利用权利要求1所述肿瘤组织消化液制备肿瘤组织单细胞悬浮液的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：获得肿瘤组织；
S2：将肿瘤组织置于平皿中，用移液器向肿瘤组织滴加2-3滴权利要求1所述肿瘤组织消化液防止干燥；
S3：将肿瘤组织切碎，添加权利要求1所述肿瘤组织消化液进行消化；置于37℃摇床30-40min，每隔15min用移液器混匀；
S4：消化完全后，过滤2次，离心；
S5：向步骤S4中离心得到的沉淀加入DPBS重悬细胞团，充分吹散后300g离心；
S6：缓慢吸取上清并丢弃，充分混匀下层细胞沉淀，得到的细胞即为活性较高的肿瘤细胞单细胞悬液。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S4的具体过程为：先用70um滤网过滤，再用40um滤网进行2次过滤后离心，离心速度为400g，时间为4min。
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