[发明专利]一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物

权利要求书

1.一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，每2mL该组合物中至少包括脐带间充质干细胞5×10^5个、PRP凝胶和100单位的凝血酶。

2.根据权利要求1所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，每2mL该组合物中还包括0.08mg NGF。

3.根据权利要求1或2所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，该组合物中，脐带间充质干细胞的平均细胞活度≥98％。

4.根据权利要求1或3所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，所述组合物按照以下步骤制成：

用2ml PRP重悬5×10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。

5.根据权利要求2或3所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，所述组合物按照以下步骤制成：

取2mlPRP，向其中加入0.08mg NGF，混合均匀，然后再将加入NGF的2ml PRP重悬5×10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。

6.根据根据权利要求1所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，

所述PRP凝胶的制备方法如下：

(1)将血样平均分装到15ml离心管中，每管不超过15ml，300g(升速9，降速7)离心8min～10min；

(2)全血分成三层，上层是上清液，下层是红细胞，两层交接处可见一层很薄的浅黄色界面，即PRP层，用移液枪接触液面，小心地吸取全部上清液至交界面下3mm，转移到15ml离心管中，配平，800g(升速9，降速7)离心6min；

(3)离心管中液体分为两层，吸取3/4上清液用移液器转移到另一个离心管中，剩余血清用移液器接触液面，小心的吸取上清液至交界面下3mm，转移到新离心管中，即PRP凝胶。

7.根据根据权利要求6所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，

步骤(1)中离心时间为8min。

8.根据根据权利要求1所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，

所述脐带间充质干细胞的培养方式如下：

(1)平置培养瓶使脐带组织块尽量均匀分布于整个底面，将培养瓶放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱；培养条件：37℃，二氧化碳体积分数为5％；

(2)一周以后，拿出培养瓶，观察有无干细胞生长，每日观察，直至有干细胞生长，开始换液；

(3)半量换液：若观察到培养瓶内有干细胞生长，进行半量换液，稍稍倾斜培养瓶，用移液管轻轻吸掉旧的培养基(注意不要将组织块吸出)，补足等量新鲜培养基，放置二氧化碳恒温恒湿培养箱开始培养，培养条件：37℃，二氧化碳体积分数为5％，观察细胞生长情况，细胞集中的地方融合度达到80％～90％；

(4)吸弃培养瓶中的培养液及组织块，并用氯化钠注射液轻轻冲洗细胞培养瓶1～2遍；

(5)消化：消化细胞，消化至在倒置显微镜镜下观察到细胞大部分由梭形变为圆形并脱落；

(6)收集细胞，原培养瓶中每瓶加入10～15ml氯化钠注射液轻轻吹打，将贴壁细胞吹打下来；

(7)过滤：收集细胞悬液至50ml离心管，筛网过滤；

(8)细胞计数：轻轻吹打，重悬细胞，吹打混匀，取样计数；

(9)离心洗涤：计数5×10^5离心洗涤，离心上清液倒掉，底部干细胞即为脐带间充质干细胞。