[发明专利]一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法

权利要求书

1.一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将PLLA常温条件下溶于三氯甲烷内，得到质量浓度为12-15％的溶解液置于模具内并加入冰晶片，搅拌混合处理，之后进行真空冷冻干燥处理，最后进行加热干燥，制得聚乳酸多孔凝胶；

(2)将纳米羟基磷灰石分散于去离子水中制得纳米羟基磷灰石分散液；将琼脂糖和去离子水加热溶解制得琼脂糖溶液，滴加纳米羟基磷灰石分散液，最后加入上述制得的聚乳酸多孔凝胶，搅拌混合处理，最后降温凝胶化处理，干燥后制得柱层析填料；

(3)将上述制得的柱层析填料装进层析柱内，首先采用PBS缓冲液对层析柱进行预平衡处理，然后将待纯化的双特异性抗体样品上样至层析柱内；然后采用PBS缓冲液进行清洗；最后采用洗脱液对层析柱进行洗脱，并收集洗脱液，制得纯化的双特异性抗体。

2.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述冰晶片的添加量为PLLA质量的5-10％。

3.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述真空冷冻干燥的条件为：首先在-1～-5℃、0.01-0.04MPa的压力下处理1-2h，然后在-30～-40℃下处理10-20h。

4.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述加热干燥的温度为35-45℃，所述加热干燥的时间为5-10h。

5.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述纳米羟基磷灰石分散液的质量浓度为1-4％；所述琼脂糖溶液的主质量浓度为3-5％，所述纳米羟基磷灰石、所述琼脂糖、所述聚乳酸多孔凝胶的质量比为3：(1-2)：10。

6.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述加热溶解的温度为95-100℃，加热溶解的时间为1-2h。

7.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述搅拌混合处理的转速为800-1000rpm，温度为95-100℃，时间为60-100min。

8.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述降温凝胶化处理的条件为：首先以5-8℃/min的速率降温至55-65℃，搅拌处理30-50min，最后以1℃/min的降温速率降温至常温，搅拌处理3-5h。

9.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述PBS缓冲液的pH为7-7.5。

10.根据权利要求1所述的一种基于柱层析法分离目标双特异性抗体与副产物的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述洗脱液为0.35-0.55mol/L的甘氨酸溶液，其pH为2.5-3.5。